靶向ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体的构建

来源 :生物学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：victorcaijun

【摘要】

：

构建靶向人ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体并检测其基因敲除功能。设计2个gRNA,分别靶向人ezrin增强子关键区的上、下游。合成gRNA寡核苷酸序列,连接至质粒pX459构建重

【作者】

：

郭晓龙张青峰野庆松莫镇涛李文娜高书颖

【机构】

：

遵义医学院珠海校区生物工程系

【出处】

：

生物学杂志

【发表日期】

：

2017年6期

【关键词】

：

靶向敲除 ezrin增强子 CRISPR/Cas9 target knockout ezrin enhancer CRISPR/Cas9

【基金项目】

：

国家自然科学基金(31360212),贵州省科技厅联合基金(LKZ\\[2013\\]04),贵州省科学技术基金(黔科合J字\\[2014\\]2180号)

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构建靶向人ezrin增强子关键区的CRISPR/Cas9载体并检测其基因敲除功能。设计2个gRNA,分别靶向人ezrin增强子关键区的上、下游。合成gRNA寡核苷酸序列,连接至质粒pX459构建重组质粒pX459sgRNAEL和pX459sgRNAER。将鉴定正确的CRISPR/Cas9重组质粒共转染至食管癌EC109细胞中,提取细胞基因组DNA,针对gRNA靶位点两侧进行PCR扩增和亚克隆测序分析。经限制性内切酶酶切和测序鉴定表明,CRISPR/Cas9重组质粒构建正确。在共转染重组质粒的细胞基因组DN

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