论文部分内容阅读
摘要：目的 探讨参蛤益肺胶囊调节COPD大鼠稳定期IgG、IgM的实验研究。方法 将50只SD大鼠隨机分组，空白组10只、余下40只造模。造模成功后，随机分为模型组、参蛤益肺胶囊常规剂量组（常规剂量组）、参蛤益肺胶囊高剂量组（高剂量组）、茶碱组各10只，给药后分别于第12周、18周采集大鼠血清并行ELISA测定。结果 实验12、18周结束后，模型组血清中IgG、IgM的表达水平较空白组降低（P<0.05），其余组IgG、IgM的表达水平均有所上升（P<0.05），而高剂量组IgG、IgM的表达水平上升最为显著。结论 参蛤益肺胶囊可提升COPD稳定期大鼠血清中IgG、IgM的表达水平，而参蛤益肺胶囊高剂量组疗效越佳，从而提高机体免疫，延缓COPD病程的进展。
关键词：参蛤益肺胶囊;COPD;大鼠;IgG;IgM
中图分类号：R285 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2019）07-0065-02
慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary diseases，COPD）为一种可防治的疾病，主要表现为持续性呼吸道症状及气流受限[1]。全球发病率高，约为4%-10%。WHO预计到2030年，COPD将成为继全球缺血性心脏病及猝死之后的的第三大死亡原因[2]。至今，针对COPD的发病机制研究较多，而免疫机制备受关注。其中，IgG、IgM为主要研究对象。本实验旨在观察参蛤益肺胶囊对稳定期COPD大鼠血清中IgG、IgM表达水平的影响，进一步讨论免疫机制。
1 材料
1.1 实验动物 清洁级SD大鼠50只，雌雄各25只，雌鼠体重为（230±10）g，雄鼠体重为（290±10）g。
1.2 实验药物及试剂 西南医科大学附属中医医院生产的参蛤益肺胶囊（0.33 g/粒），广州迈特兴华制药厂生产的茶碱缓释片（0.1 g/片），IgG、IgM ELISA试剂盒。
2 方法
2.1 造模及分组 从50只清洁级SD大鼠中，分别挑选出5只雌鼠和雄鼠作为空白组，造模组为剩下的40只大鼠。根据实验研究经验，COPD稳定期大鼠模型的建立采用烟熏联合肺炎克雷伯氏杆菌感染的方法。造模成功后以雌雄各半为原则分为4组：模型组8只、常规剂量组10只、高剂量组10只、茶碱组10只。
2.2 观察造模组大鼠
2.2.1 大鼠的一般情况 各造模组精神萎靡，皮毛枯燥，张口喘息，频繁咳嗽，行动迟钝，进食少，大便干，小便调。
2.2.2 大鼠肺与气道组织的病理学改变 造模组各级支气管纤毛变性、稍紊乱，部分脱落，鳞状上皮化生，杯状细胞数目明显增多，腺体肥大，支气管管壁明显增厚，可见中性粒、淋巴细胞等炎性细胞浸润，肺泡壁变薄，肺泡腔明显扩大，大部分肺泡破裂后形成肺大泡，血管水肿、渗出、管壁明显增厚。
2.3 给药 第7周的第1 d开始给药，空白组、模型组以同等容积的蒸馏水灌胃，各治疗组则以相应的药物灌胃.常规剂量组：0.42 g/kg/d，高剂量组：0.62 g/kg/d，茶碱组：0.02 g/kg/d。
2.4 采集血清 分别在第12、18周结束后的第1 d取材，取材前所有大鼠禁食12 h（除水），麻醉后采集腹主动脉血，将其静置于4℃冰箱4 h，取出后以3000 r/min的转速离心10 min，将其血清于-80℃冰箱内保存待测。
3 统计学方法
统计描述采用软件SPSS17.0，其中用均数及标准差表示定量资料，选用独立样本t检验来行组间比较（2组）;或者单因素方差分析（3组及以上）。
4 结果
4.1 12周、18周各组大鼠血清中IgG、IgM的比较 见表1。
由表1可知，12周IgG、IgM分别为：F=286.335，P=0.001，F=282.791，P=0.001，差异均具有统计学意义。因此，结果示模型组vs 常规剂量组、模型组vs 高剂量组、模型组vs 茶碱组、高剂量组vs 常规剂量组、高剂量组vs 茶碱组均有统计学意义（P<0.05）;常规剂量组vs 茶碱组无统计学意义（P>0.05）。18周IgG、IgM分别为：F=931.454，P=0.001，F=350.691，P=0.001，差异均具有统计学意义。因此，结果示模型组vs 常规剂量组、模型组vs 高剂量组、模型组vs 茶碱组、高剂量组vs 常规剂量组、高剂量组vs 茶碱组均有统计学意义（P<0.05）;常规剂量组vs 茶碱组无统计学意义（P>0.05）。
5 讨论
既往研究显示，在多次急性加重后，COPD患者的肺功能逐渐降低。因此加强稳定期治疗，是控制COPD病情进行性发展的关键[3]。多数研究表明免疫与COPD的发生、发展及转归密切相关[4]。免疫力低下时，免疫功能频繁发生紊乱，易反复感染，炎症不断刺激气道壁增厚、管壁破裂，肺泡腔扩大，形成气道重塑、肺大泡等，加速COPD病程的进展[5]。因而，COPD稳定期的免疫治疗显得格外重要。潘玲等[6]认为所有COPD患者存在免疫功能下降及紊乱，主要表现为血清中IgG明显下降。卢丽君等[7]认为COPD患者存在免疫低下、免疫功能失调，在增强免疫的中医中药治疗后，免疫指标IgG和IgM明显改善，免疫功能明显提高，表明免疫功能与COPD密切相关。
COPD属中医“肺胀”范畴，《灵枢·胀论》曰：“肺胀者，虚满而喘咳。”[8]《灵枢·经脉》：“肺手太阴之脉……是动则病肺胀满膨膨而咳喘。”[9]临床上主要表现为咳嗽、咯痰、喘气、水肿、发绀、心悸等症状，其病位主要在肺脾肾，性属本虚标实，稳定期病机为肺脾肾虚、痰瘀互结，以虚为主。参蛤益肺胶囊由红参、蛤蚧、三七、川芎等药物组成，共奏补肺益肾，化瘀祛痰，纳气平喘，标本兼治之功。国内外报道中，对上述药物的现代药理研究较多。黄宝亮等[10]实验研究表明红参非皂苷类物质-精氨酸双糖苷能对抗小鼠疲劳，同时影响其免疫功能。杨帆等[11]运用蛤肽作用于小鼠，实验研究表明蛤蚧肽能提升小鼠的免疫力，以NK细胞的增加为主。谭亮等[12]认为三七皂苷R1对心脑系统、神经系统、肝脏、肺动脉高压、肠道等均有保护作用，同时可抗肿瘤及提升免疫力。周时[13]认为川芎嗪对心、脑、肺、肾等血管均有扩张作用，可缓解肺动脉高压;同时川芎嗪能提高免疫力，通过促进淋巴细胞的表达等。可见，以上药物均有提高免疫力作用。 本实验COPD稳定期大鼠模型的建立采用烟熏联合肺炎克雷伯氏杆菌感染的方法，更符合COPD稳定期病机。从实验结果上看，实验12、18周结束后，模型组血清中IgG、IgM的表达水平较空白组降低（P<0.05），其余组IgG、IgM的表达水平均有所上升（P<0.05）。说明参蛤益肺胶囊可提升COPD稳定期大鼠血清中IgG、IgM的表达水平，从而提高机体免疫，延缓COPD病程的进展。
参考文献：
[1]陈亚红，2019 gOLD慢性阻塞性肺疾病诊断、治疗及预防全球策略解读[J].中国医学前沿杂志，2019，11（1）.
[2]章潜，严萍.健脾益气方对不同分级慢性阻塞性肺疾病稳定期患者的影响[J].中国中医药科技，2017，24（4）：495-496.
[3]付敏，孙增涛.慢性阻塞性肺疾病研究进展及中医治疗的思考[J].中国中医急症，2012，21（4）：544-545+553.
[4]陈立文，李崇文.不同病程COPD患者免疫功能的临床分析[J].中国实验诊断学，2017，21（1）：32-34.
[5]邬学斌，高雷山，夏阳，等.祛瘀补肺中药治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期疗效及对免疫功能、炎性细胞因子水平的影响[J].现代中西医结合杂志，2017，26（20）：2188-2191.
[6]潘玲，毛德强，罗玲.慢性阻塞性肺病患者外周血中T细胞及IgA、IgG等免疫功能情况的研究[J].国际呼吸杂志，2014，34（13）：974-976.
[7]卢丽君，杜晓红，黄炎芳.温补肺肾法对慢性阻塞性肺疾病稳定期患者肺功能及免疫功能的影响[J].实用临床医药杂志，2017，21（11）：38-41.
[8]于佳琦.肺脹古代文献研究[D].辽宁中医药大学，2010.
[9]胡宗仁.慢性阻塞性肺疾病稳定期的古代文献研究[D].湖南中医药大学，2017.
[10]黄宝亮，刘博宇，王佳奇，等.红参非皂苷类物质精氨酸双糖苷对小鼠疲劳及免疫功能的影响[J].中国药学杂志，2016，（15）：27-29.
[11]杨帆，席伟，谢裕安，等.蛤蚧肽对小鼠免疫功能的调节作用[J].广西医科大学学报，2011，28（3）：342-344.
[12]谭亮，汤秋凯，王守章，等.三七皂苷R1药理作用的研究进展[J].中国药理学通报，2018，34（5）：604-607.
[13]周时.中药川芎中有效成分的药理作用研究[J].内蒙古中医药，2015，（5）：157-157，170.
（收稿日期：2019-04-11）
关键词：参蛤益肺胶囊;COPD;大鼠;IgG;IgM
中图分类号：R285 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2019）07-0065-02
慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary diseases，COPD）为一种可防治的疾病，主要表现为持续性呼吸道症状及气流受限[1]。全球发病率高，约为4%-10%。WHO预计到2030年，COPD将成为继全球缺血性心脏病及猝死之后的的第三大死亡原因[2]。至今，针对COPD的发病机制研究较多，而免疫机制备受关注。其中，IgG、IgM为主要研究对象。本实验旨在观察参蛤益肺胶囊对稳定期COPD大鼠血清中IgG、IgM表达水平的影响，进一步讨论免疫机制。
1 材料
1.1 实验动物 清洁级SD大鼠50只，雌雄各25只，雌鼠体重为（230±10）g，雄鼠体重为（290±10）g。
1.2 实验药物及试剂 西南医科大学附属中医医院生产的参蛤益肺胶囊（0.33 g/粒），广州迈特兴华制药厂生产的茶碱缓释片（0.1 g/片），IgG、IgM ELISA试剂盒。
2 方法
2.1 造模及分组 从50只清洁级SD大鼠中，分别挑选出5只雌鼠和雄鼠作为空白组，造模组为剩下的40只大鼠。根据实验研究经验，COPD稳定期大鼠模型的建立采用烟熏联合肺炎克雷伯氏杆菌感染的方法。造模成功后以雌雄各半为原则分为4组：模型组8只、常规剂量组10只、高剂量组10只、茶碱组10只。
2.2 观察造模组大鼠
2.2.1 大鼠的一般情况 各造模组精神萎靡，皮毛枯燥，张口喘息，频繁咳嗽，行动迟钝，进食少，大便干，小便调。
2.2.2 大鼠肺与气道组织的病理学改变 造模组各级支气管纤毛变性、稍紊乱，部分脱落，鳞状上皮化生，杯状细胞数目明显增多，腺体肥大，支气管管壁明显增厚，可见中性粒、淋巴细胞等炎性细胞浸润，肺泡壁变薄，肺泡腔明显扩大，大部分肺泡破裂后形成肺大泡，血管水肿、渗出、管壁明显增厚。
2.3 给药 第7周的第1 d开始给药，空白组、模型组以同等容积的蒸馏水灌胃，各治疗组则以相应的药物灌胃.常规剂量组：0.42 g/kg/d，高剂量组：0.62 g/kg/d，茶碱组：0.02 g/kg/d。
2.4 采集血清 分别在第12、18周结束后的第1 d取材，取材前所有大鼠禁食12 h（除水），麻醉后采集腹主动脉血，将其静置于4℃冰箱4 h，取出后以3000 r/min的转速离心10 min，将其血清于-80℃冰箱内保存待测。
3 统计学方法
统计描述采用软件SPSS17.0，其中用均数及标准差表示定量资料，选用独立样本t检验来行组间比较（2组）;或者单因素方差分析（3组及以上）。
4 结果
4.1 12周、18周各组大鼠血清中IgG、IgM的比较 见表1。
由表1可知，12周IgG、IgM分别为：F=286.335，P=0.001，F=282.791，P=0.001，差异均具有统计学意义。因此，结果示模型组vs 常规剂量组、模型组vs 高剂量组、模型组vs 茶碱组、高剂量组vs 常规剂量组、高剂量组vs 茶碱组均有统计学意义（P<0.05）;常规剂量组vs 茶碱组无统计学意义（P>0.05）。18周IgG、IgM分别为：F=931.454，P=0.001，F=350.691，P=0.001，差异均具有统计学意义。因此，结果示模型组vs 常规剂量组、模型组vs 高剂量组、模型组vs 茶碱组、高剂量组vs 常规剂量组、高剂量组vs 茶碱组均有统计学意义（P<0.05）;常规剂量组vs 茶碱组无统计学意义（P>0.05）。
5 讨论
既往研究显示，在多次急性加重后，COPD患者的肺功能逐渐降低。因此加强稳定期治疗，是控制COPD病情进行性发展的关键[3]。多数研究表明免疫与COPD的发生、发展及转归密切相关[4]。免疫力低下时，免疫功能频繁发生紊乱，易反复感染，炎症不断刺激气道壁增厚、管壁破裂，肺泡腔扩大，形成气道重塑、肺大泡等，加速COPD病程的进展[5]。因而，COPD稳定期的免疫治疗显得格外重要。潘玲等[6]认为所有COPD患者存在免疫功能下降及紊乱，主要表现为血清中IgG明显下降。卢丽君等[7]认为COPD患者存在免疫低下、免疫功能失调，在增强免疫的中医中药治疗后，免疫指标IgG和IgM明显改善，免疫功能明显提高，表明免疫功能与COPD密切相关。
COPD属中医“肺胀”范畴，《灵枢·胀论》曰：“肺胀者，虚满而喘咳。”[8]《灵枢·经脉》：“肺手太阴之脉……是动则病肺胀满膨膨而咳喘。”[9]临床上主要表现为咳嗽、咯痰、喘气、水肿、发绀、心悸等症状，其病位主要在肺脾肾，性属本虚标实，稳定期病机为肺脾肾虚、痰瘀互结，以虚为主。参蛤益肺胶囊由红参、蛤蚧、三七、川芎等药物组成，共奏补肺益肾，化瘀祛痰，纳气平喘，标本兼治之功。国内外报道中，对上述药物的现代药理研究较多。黄宝亮等[10]实验研究表明红参非皂苷类物质-精氨酸双糖苷能对抗小鼠疲劳，同时影响其免疫功能。杨帆等[11]运用蛤肽作用于小鼠，实验研究表明蛤蚧肽能提升小鼠的免疫力，以NK细胞的增加为主。谭亮等[12]认为三七皂苷R1对心脑系统、神经系统、肝脏、肺动脉高压、肠道等均有保护作用，同时可抗肿瘤及提升免疫力。周时[13]认为川芎嗪对心、脑、肺、肾等血管均有扩张作用，可缓解肺动脉高压;同时川芎嗪能提高免疫力，通过促进淋巴细胞的表达等。可见，以上药物均有提高免疫力作用。 本实验COPD稳定期大鼠模型的建立采用烟熏联合肺炎克雷伯氏杆菌感染的方法，更符合COPD稳定期病机。从实验结果上看，实验12、18周结束后，模型组血清中IgG、IgM的表达水平较空白组降低（P<0.05），其余组IgG、IgM的表达水平均有所上升（P<0.05）。说明参蛤益肺胶囊可提升COPD稳定期大鼠血清中IgG、IgM的表达水平，从而提高机体免疫，延缓COPD病程的进展。
参考文献：
[1]陈亚红，2019 gOLD慢性阻塞性肺疾病诊断、治疗及预防全球策略解读[J].中国医学前沿杂志，2019，11（1）.
[2]章潜，严萍.健脾益气方对不同分级慢性阻塞性肺疾病稳定期患者的影响[J].中国中医药科技，2017，24（4）：495-496.
[3]付敏，孙增涛.慢性阻塞性肺疾病研究进展及中医治疗的思考[J].中国中医急症，2012，21（4）：544-545+553.
[4]陈立文，李崇文.不同病程COPD患者免疫功能的临床分析[J].中国实验诊断学，2017，21（1）：32-34.
[5]邬学斌，高雷山，夏阳，等.祛瘀补肺中药治疗慢性阻塞性肺疾病稳定期疗效及对免疫功能、炎性细胞因子水平的影响[J].现代中西医结合杂志，2017，26（20）：2188-2191.
[6]潘玲，毛德强，罗玲.慢性阻塞性肺病患者外周血中T细胞及IgA、IgG等免疫功能情况的研究[J].国际呼吸杂志，2014，34（13）：974-976.
[7]卢丽君，杜晓红，黄炎芳.温补肺肾法对慢性阻塞性肺疾病稳定期患者肺功能及免疫功能的影响[J].实用临床医药杂志，2017，21（11）：38-41.
[8]于佳琦.肺脹古代文献研究[D].辽宁中医药大学，2010.
[9]胡宗仁.慢性阻塞性肺疾病稳定期的古代文献研究[D].湖南中医药大学，2017.
[10]黄宝亮，刘博宇，王佳奇，等.红参非皂苷类物质精氨酸双糖苷对小鼠疲劳及免疫功能的影响[J].中国药学杂志，2016，（15）：27-29.
[11]杨帆，席伟，谢裕安，等.蛤蚧肽对小鼠免疫功能的调节作用[J].广西医科大学学报，2011，28（3）：342-344.
[12]谭亮，汤秋凯，王守章，等.三七皂苷R1药理作用的研究进展[J].中国药理学通报，2018，34（5）：604-607.
[13]周时.中药川芎中有效成分的药理作用研究[J].内蒙古中医药，2015，（5）：157-157，170.
（收稿日期：2019-04-11）