【摘 要】
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通过PCR和反向PCR,从蜡样芽孢杆菌M22中扩增到2条长度为1 322 bp和1 395 bp的基因片段(GenBank登录号为AY540749和AY468485),分别含657 bp和627 bp的开放阅读框,各自编码218
【机 构】
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浙江大学农业与生物技术学院,中国农业大学农学与生物技术学院
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划);
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通过PCR和反向PCR,从蜡样芽孢杆菌M22中扩增到2条长度为1 322 bp和1 395 bp的基因片段(GenBank登录号为AY540749和AY468485),分别含657 bp和627 bp的开放阅读框,各自编码218个和208个氨基酸残基的功能蛋白.2个蛋白氨基酸序列同源性为46%,均不含信号肽.与其它锰超氧化物歧化酶序列同源性高,保守氨基酸残基类型及位置与其它Mn-SOD相同,可确定2个基因均为蜡样芽孢杆菌Mn-SOD基因.分别将2个基因的开放阅读框插入载体pET-22b(+)构建表达质粒pET-sodA,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达.SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量分别为28 kD和27 kD.转入pET-sodA的SOD缺陷型大肠杆菌QC779转化子恢复在10 μmol/L paraquat的LB平板上生长的能力.活性电泳显示,M22的Mn-SOD在QC779中成功表达.
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