【摘 要】
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目的:观察瘦素(LEP)对缺氧诱导胎鼠肺Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)凋亡的拮抗作用,并探讨其机制。方法:采用改良免疫黏附法原代培养胎鼠AECⅡ细胞,并用SP-A免疫细胞化学法和透射电镜
【机 构】
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中山大学附属第二医院妇产科,中山大学医学院生物化学教研室
【基金项目】
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广东省自然科学基金资助项目(No.2003B30505)
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目的:观察瘦素(LEP)对缺氧诱导胎鼠肺Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)凋亡的拮抗作用,并探讨其机制。方法:采用改良免疫黏附法原代培养胎鼠AECⅡ细胞,并用SP-A免疫细胞化学法和透射电镜进行鉴定;用含5mmol/L连二亚硫酸钠(Na2S2O4)培养液培养AECⅡ细胞12h建立缺氧诱导细胞凋亡模型,处理组含不同浓度LEP(100-1600μg/L);噻唑兰(MTT)比色法检测细胞存活情况;流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期;蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测凋亡蛋白caspase3的表达。结果:采用免疫黏附法获得高纯度原代培养的AECⅡ细胞,免疫细胞化学法示SP-A阳性表达,电镜下可见细胞内特征性板层小体;5mmol/LNa2S2O4能诱导AECⅡ细胞凋亡和caspase3活化,LEP(100-1600μg/L)能减轻Na2S2O4所致的细胞损伤,表现为AECⅡ存活率提高、增殖指数(PI)增高及凋亡峰下降、细胞形态恢复和caspase3活化受抑制。结论:LEP可拮抗缺氧所致AECⅡ细胞凋亡,这可能与其促使细胞周期从G1期进入S期及抑制凋亡蛋白caspase3活化有关。
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