【摘 要】
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目的:观察甘草查尔酮A对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响,并探讨其可能作用机制.方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测不同浓度甘草查尔酮A对MDA-MB-231细胞存活率的影响;甘草查尔酮A(10,20,40μmol·L-1)作用MDA-MB-231细胞24 h,分别用细胞凋亡试剂盒(AnnexinV-FITC/PI)检测细胞凋亡情况;荧光探针法(DCFA-DA)检测细胞内活性氧(ROS)水平,荧光探针(JC-1)法检测细胞线粒体膜电位(MMP);蛋白免疫印迹法(Western blot)
【机 构】
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海军军医大学长海医院,上海200433;上海市普陀区中心医院,上海200062
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目的:观察甘草查尔酮A对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响,并探讨其可能作用机制.方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测不同浓度甘草查尔酮A对MDA-MB-231细胞存活率的影响;甘草查尔酮A(10,20,40μmol·L-1)作用MDA-MB-231细胞24 h,分别用细胞凋亡试剂盒(AnnexinV-FITC/PI)检测细胞凋亡情况;荧光探针法(DCFA-DA)检测细胞内活性氧(ROS)水平,荧光探针(JC-1)法检测细胞线粒体膜电位(MMP);蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)的表达及内质网应激相关蛋白(CHOP),转录激活因子4(ATF4),蛋白激酶R样内质网激酶(PERK),磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶(p-PERK),真核翻译起始因子2α(eIF2α),磷酸化真核翻译起始因子2α(p-eIF2α)表达.结果:与空白组比较,随着甘草查尔酮A浓度增大,从甘草查尔酮A 5μmo1·L-1开始,细胞存活率明显降低(P＜0.05),其半数抑制浓度(IC50)为19.05 μmol· L1;甘草查尔酮A(10,20,40 μmol·L-1)组细胞凋亡明显升高(P＜0.05),甘草查尔酮A 40 μmol·L-1时细胞凋亡率达30.2％(P＜0.05);甘草查尔酮A(10,20,40 μmol· L-1)使抗凋亡蛋白Bcl-2的表达明显降低(P＜0.05),促凋亡蛋白Bax表达明显升高(P＜0.05),且呈浓度依赖性;甘草查尔酮A(10,20,40 μmol· L-1)明显升高细胞内ROS水平(P＜0.05),降低线粒体MMP水平(P＜0.05),导致线粒体功能障碍,呈浓度依赖性;甘草查尔酮A(10,20,40 μmol·L-1)诱导内质网应激,使内质网应激相关蛋白CHOP,ATF4表达明显增多,磷酸化(p)-PERK,p-eIF2α表达明显升高(P＜0.05),呈浓度依赖性.结论:甘草查尔酮A可能通过增加细胞内ROS水平,降低MMP引起线粒体功能障碍和内质网应激诱导MDA-MB-231细胞凋亡.
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