【摘 要】
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为了得到制备抗原芯片所需的高纯度重组抗原蛋白,需要建立一套适合于多种重组抗原表达和纯化的技术路线.采用了亲和层析结合制备胶电泳的方法,对16种用于构建蛋白质芯片的食
【机 构】
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新疆大学生命科学与技术学院,新疆生物资源基因工程重点实验室; 中国协和医科大学肿瘤研究所; 基因有限公司北京分公司;
【基金项目】
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“十五”国家科技攻关项目(2004BA703B05);新疆大学博士启动基金(BS050105)资助项目~~
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为了得到制备抗原芯片所需的高纯度重组抗原蛋白,需要建立一套适合于多种重组抗原表达和纯化的技术路线.采用了亲和层析结合制备胶电泳的方法,对16种用于构建蛋白质芯片的食管癌相关抗原基因进行了克隆重组并在大肠杆菌中进行了表达.对高表达的重组蛋白首先制备包涵体,然后采用Ni-Sepharose亲和层析得到初步纯化的蛋白质,最后使用SDS-PAGE制备胶电泳作进一步纯化.经过透析复性后,用于制备蛋白质芯片.采用亲和层析纯化重组蛋白,得率为71%,纯度约为70%;在SDS-PAGE制备胶进一步纯化后,得率为32%,纯度为95%,经过透析和复性后,最终得率为21%,纯度为95%.得到的重组蛋白RPS4在ELISA检测中可以和血清中识别RPS4的自身抗体起反应,并且,采用精纯抗原制备的蛋白质芯片,在检测抗原与抗体这一对反应中也具有较高的敏感性和特异性,适合大规模血清抗体的检测.研究表明,采用亲和层析结合制备凝胶电泳纯化抗原蛋白,是一条简便快捷,适合需要量不大,但对纯度要求比较高的蛋白质芯片制备的技术路线.
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