【摘 要】
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目的 探讨兔肌源性干细胞分离、鉴定及诱导分化为平滑肌细胞的方法.方法 取1.5个月龄新西兰兔大腿肌肉,采用Preplate技术分离培养肌源性细胞,并进行流式细胞仪(FCM)、免疫细
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目的 探讨兔肌源性干细胞分离、鉴定及诱导分化为平滑肌细胞的方法.方法 取1.5个月龄新西兰兔大腿肌肉,采用Preplate技术分离培养肌源性细胞,并进行流式细胞仪(FCM)、免疫细胞化学、Western blot等确定细胞表型.采用添加血管内皮生长因子(VEGF)和与兔阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)共培养的方法诱导分离而得的细胞分化为平滑肌细胞并运用免疫细胞化学和Western blot检测特异性α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 经过连续6 d的差速贴壁分离得到小圆形或短梭形的小体积细胞,FCM结果显示这些细胞＞80%为desmin+,＞70%为bd-2+,＞95%为CD45-.免疫细胞化学定性结果显示desmin+.高汇合度(＞50%)或低血清培养时容易融合形成肌管或肌细胞核链.诱导处理后分离的细胞表达α-SMA.结论 采用Preplate技术能很好地分离出肌源性干细胞,并能在体外诱导分化为平滑肌细胞,为组织工程提供种子细胞.
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