【摘 要】
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目的 观察小鼠肝组织经胶原酶Ⅳ不同时长原位消化后Kupffer细胞的分选效果及其肿瘤细胞吞噬功能。方法 用0.04%胶原酶Ⅳ进行小鼠肝脏原位灌注及肝脏组织消化，根据消化时间长短（5、10、20 min）分为5 min消化组、10 min消化组、20 min消化组。Percoll密度梯度离心后获取肝脏非实质细胞（NPC），通过台盼蓝染色计算细胞活率；免疫细胞磁珠分选（MACS）分选Kupffer细胞
【机 构】
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海军军医大学基础医学院医学遗传学教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（92059111,81972738）； 上海市科技创新行动计划实验动物研究领域项目（22140902100）； 上海市卫生健康委员会卫生行业临床研究专项课题（20214Y0014）；
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目的 观察小鼠肝组织经胶原酶Ⅳ不同时长原位消化后Kupffer细胞的分选效果及其肿瘤细胞吞噬功能。方法 用0.04%胶原酶Ⅳ进行小鼠肝脏原位灌注及肝脏组织消化，根据消化时间长短（5、10、20 min）分为5 min消化组、10 min消化组、20 min消化组。Percoll密度梯度离心后获取肝脏非实质细胞（NPC），通过台盼蓝染色计算细胞活率；免疫细胞磁珠分选（MACS）分选Kupffer细胞后通过台盼蓝染色计数Kupffer细胞总数，除以NPC总数，获得Kupffer细胞MACS分选后占比；光学显微镜观察Kupffer细胞形态学变化；流式细胞术分析Kupffer细胞在MACS分选前占NPC总数的比例，再用Kupffer细胞MACS分选后占比除以分选前占比得到MACS分选得率。体外共培养MACS分选所得Kupffer细胞与肿瘤细胞，流式细胞术检测Kupffer细胞对肿瘤细胞的吞噬功能。结果 胶原酶Ⅳ灌注后的肝组织在0.04%胶原酶Ⅳ中于37℃继续消化5 min时NPC总活率、MACS分选的Kupffer细胞数目及Kupffer细胞占NPC的比例、MACS分选得率和细胞形态分析都显示提取效果更佳；且消化5 min时Kupffer细胞对肿瘤细胞的吞噬活性显著高于消化10 min和20 min消化组。结论 适当的胶原酶Ⅳ消化时间对Kupffer细胞肝脏原位灌注结合MACS提取是有利的，而且也更有助于Kupffer细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。
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