【摘 要】
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目的:探讨Bcl-2基因对丝裂霉素C(MMC)诱导的膀胱癌细胞凋亡的抑制作用及其分子机制。方法:采用DNA重组技术构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2;利用脂质体将重组载体pcDNA3.1
【机 构】
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中国医科大学附属盛京医院泌尿外科,中国医科大学附属第一医院泌尿外科
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目的:探讨Bcl-2基因对丝裂霉素C(MMC)诱导的膀胱癌细胞凋亡的抑制作用及其分子机制。方法:采用DNA重组技术构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2;利用脂质体将重组载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2和空载体pcDNA3.1(+)转入人膀胱癌BIU-87细胞,RT-PCR检测基因转录水平;MMC作用于转染前、后的细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、吖啶橙(AO)荧光染色法、Westernblot技术对细胞生长、凋亡、Caspase-3活性及细胞色素C在细胞内分布的变化进行检测。结果:1)成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/Bcl-2,建立Bcl-2基因高表达的膀胱癌细胞株BIU-87/Bcl-2。2)在MMC作用下,与未转染Bcl-2基因的膀胱癌细胞株BIU-87和BIU-87/neo相比,BIU-87/Bcl-2细胞株存活率上升,P<0.01,其IC50是后者的15倍,q=6.41,P<0.01;BIU-87/Bcl-2的凋亡率显著降低,q值分别为22.62和20.45,P值均<0.01,Caspase-3激活和线粒体细胞色素C的释放受到抑制,BIU-87/Bcl-2的A405显著低于BIU-87和BIU-87/neo,q值分别为28.20和26.70,P值均<0.01,表明BIU-87/Bcl-2的Caspase-3激活受限。结论:Bcl-2基因高表达通过抑制线粒体细胞色素C的释放和Caspase-3的激活,使膀胱癌细胞对MMC诱导的凋亡产生抗性,导致耐药性的产生。
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