目的 探讨孕妇外周血中游离胎儿DNA检测在无创产前诊断中的临床应用价值.方法 2010年9月至2012年3月在河南省人民医院因性连锁遗传性疾病家族史行产前诊断的孕9 ～12周的孕妇共103例为早孕组;2010年10月至2012年1月在河南省人民医院行羊水染色体产前诊断的孕14 ～ 24周的孕妇205例为中孕组.采用实时定量PCR和荧光标记PCR技术检测早孕组孕妇外周血中游离胎儿DNA的Y染色体性别决定基因(SRY)和牙釉质基因(AML),其中33例男性胎儿及其父亲进行12个Y染色体短串联重复序列(Y-STR)基因座检测.采用大规模平行测序法对中孕组孕妇外周血中游离胎儿DNA进行染色体非整倍体检测.结果(1)早孕组103例游离胎儿DNA检测结果中,有53例SRY检测阳性,50例SRY检测阴性;与绒毛组织中SRY检测结果相比较,游离胎儿DNA检测SRY有1例假阴性和1例假阳性,其敏感度为98％,特异度为98％.在AML检测中,男胎样本扩增产物中有片段为102 bp的X染色体扩增产物(AML-X)和片段为108 bp的Y染色体扩增物(AML-Y)两种;女胎扩增产物样本仅有AML-X的产物峰.早孕组103例中,52例检测到102 bp和108 bp产物峰,51例仅检测到102 bp产物峰.与绒毛组织中SRY检测结果相比较,有2例出现假阴性,敏感度为96％,特异度为100％.(2)对SRY定量分析浓度≥30 copy/ml的33例胎儿的游离DNA及其父亲外周血基因组DNA进行了Y-STR基因座分型.游离胎儿DNA 200 bp以下的Y-STR基因座均得到成功分型,200 ～ 300 bp之间的Y-STR峰值显著降低,部分基因座扩增失败,未检出超过300 bp的STR基因座.Y-STR基因座分型成功的胎儿与父亲分型结果相比较,发现其中1例存在污染,其余32例均与其父亲分型结果完全一致.(3)中孕组205例游离胎儿DNA检测结果中,共检出了6例染色体数目异常,其中21三体2例、18三体3例、45,X1例;与羊水染色体核型分析结果完全一致.此外,测序结果显示,X染色体偏少(45,Y)、chrl6偏多(16三体)各1例,而羊水染色体核型分析结果正常;测序结果显示X或Y染色体偏少1例,羊水染色体核型分析结果为47,XYY.结论 (1)孕妇外周血中游离胎儿DNA检测在早孕期无创产前胎儿性别基因诊断中具有较高的灵敏度和特异度,但是必须注意到极微量和高母源背景特点对检测结果可能的影响.(2)孕妇外周血中游离胎儿DNA大规模测序,对于中孕期21三体和18 三体的检测具有较高的准确性,可以作为传统产前诊断技术的有效辅助手段,但是在其他染色体异常的检测中还需要进一步研究。