【摘 要】
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目的 研究钠钾ATP酶DR区特异性抗体(DRSAb)对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 合成DR区多肽,免疫SD雄性大鼠制备特异性抗血清.采用Western blotting和流式细胞技
【机 构】
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西安交通大学第一附属医院肾移植科,陕西西安,710061
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目的 研究钠钾ATP酶DR区特异性抗体(DRSAb)对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 合成DR区多肽,免疫SD雄性大鼠制备特异性抗血清.采用Western blotting和流式细胞技术测定DRSAb的生物学活性、细胞信号传导机制;采用MTT法测定肾小管上皮细胞HK-2活性;采用缺血再灌注损伤模型检测DRSAb对缺血再灌注损伤大鼠肾脏的保护作用.结果 90.02％的HK2细胞可以和所制备的DRSAb结合;DRS-Ab免疫血清可增强HK-2细胞对缺氧的耐受能力,与对照血清比较差异有统计学意义(OD:0.50±0.03 vs 0.10±0.02,P＜0.001);DRSAb可以激活PI3K/AKT激酶和PKCε激酶(P＜0.001),LY294002和PEAVSLKPT可以抑制这种激活作用(P＜0.001);动物实验结果显示,DRSAb组大鼠术后3～6d血清肌酐、尿素氮水平显著低于Control组(P＜0.001).肾组织切片显示,Contro1组大鼠肾脏可见明显的血管充血、上皮细胞水肿和小管坏死;DRSAb组的大鼠肾脏可见轻微血管充血、上皮细胞轻度水肿,但无小管坏死.结论 DRSAb对缺血再灌注损伤大鼠肾脏具有一定的保护作用,这种保护作用与PI3K/AKT、PKCε信号通路活化密切相关.
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