目的研究ICU收集的耐碳青酶烯类肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、褪色沙雷菌分子流行病学特征及耐药机制。方法用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和肠杆菌科基因间重复一致性序列-PCR(ERIC-PCR)分析耐药株的分子流行病学特征,采用特异性PCR和序列分析、接合试验、质粒提取和转化试验、质粒消除试验、外膜蛋白分析技术来分析介导碳青酶烯类耐药的分子机制。结果 12株肺炎克雷伯菌分属2个流行克隆型、13株大肠埃希菌属于5个流行克隆型、3株褪色沙雷菌属于2个流行克隆型;药物敏感试验显示,分离株对亚胺培南和美罗培南的MIC分别为16～128μg/ml和8～256μg/ml;所有菌株均扩增出介导碳青酶烯类耐药的KPC-2基因;3株褪色沙雷菌接合试验获得成功,部分菌株进行质粒提取、质粒分子杂交、质粒转化和质粒消除试验显示,KPC-2定位于约为56kb的质粒上;外膜蛋白比较分析显示部分耐药菌株发生外膜蛋白改变。结论医院ICU分离出耐碳青酶烯类肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和褪色沙雷菌;产KPC-2是介导对碳青酶烯类药物耐药的主要原因;部分菌株外膜蛋白改变可能参与耐药;垂直传播以及通过质粒的水平传播可能是耐药株在ICU流行的主要方式。