【摘 要】
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目的获得活体哺乳动物脑内单一纯化的神经元群。方法用RT-PCR和激光共聚焦显微镜扫描脑片鉴定thy1-GFP-J转基因小鼠,取2月龄鉴定阳性小鼠皮层和海马组织,应用番木瓜蛋白酶分
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科,华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科,
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目的获得活体哺乳动物脑内单一纯化的神经元群。方法用RT-PCR和激光共聚焦显微镜扫描脑片鉴定thy1-GFP-J转基因小鼠,取2月龄鉴定阳性小鼠皮层和海马组织,应用番木瓜蛋白酶分离系统制备脑组织单细胞悬液,PI标记死亡细胞,流式细胞仪荧光激活细胞分类技术(FACS)分选收集GFP+和PI-的存活神经元,并抽提获得细胞的RNA和蛋白。结果阳性转基因小鼠DNA的PCR扩增鉴定显示为内参(324bp)和所转基因(173bp)两条带,脑片的激光共聚焦扫描结果显示海马和皮层均可见大小较均一的圆点状绿色荧光。经FACS分选后的细胞几乎全都发出绿色荧光,每次产量约为0.5～1×106个存活神经元。获得的纯化神经元中抽提的RNA和蛋白可用于RT-PCR和westernblot检测。结论利用FACS可以从thy1-GFP-J转基因小鼠脑内获得单一纯化的存活神经元群。该技术的应用将为活体神经元细胞特异性的基因表达和蛋白定量分析研究提供一个可行方案。
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