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背景:水翁花为中药桃金娘科植物水翁的干燥花蕾,已有报道水翁花提取物能通过抑制Na+/K+-ATP酶的活性加强心脏的收缩功能,同时降低心脏的收缩频率,水翁花提取物是否具有抗氧化方面的生物活性? 目的:观察水翁花对过氧化氢诱导的PC12神经细胞氧化损伤保护作用的量效关系。设计:非随机对照的实验。单位:华东理工大学生物工程学院生物反应器国家重点实验室。材料:实验于2002-05／11在华东理工大学反应器国家重点实验室鲁华生物技术研究所完成。选择昆明种雄性小鼠8只。PC12神经细胞购自中国科学院上海细胞所。方法:制备神经细胞氧化损伤模型。①水翁花细胞毒性测定:在96孔微量培养板中加入PC12神经细胞,水翁花以RPMI 1640培养液稀释成 0．001,0．01,0．1,0．5,1 g／L 5个浓度,每个浓度3孔,每孔接种2×103个细胞,另设空白对照组,即无药培养液组。标准条件下培养48 h,噻唑蓝比色法测定。②PC12神经细胞预先接种于96孔板中,培养24 h贴壁,分为正常对照组(正常细胞,不加H2O2和水翁花提取物)、0,0．01, 0．1,0．5,1 g／L水翁花提取物共7个组。除正常对照组外,其余细胞用 200 μmol／L的H2O2处理,加入不同浓度的水翁花水提物,作用12 h 后用噻唑蓝法测定细胞的存活率。③氧自由基水平测定:PC12神经细胞处理同存活率测定法,采用CDCFH染色法测定细胞氧自由基水平。主要观察指标:①水翁花提取物对PC12神经细胞的毒性。②水翁花提取物对氧化损伤的PC12神经细胞存活率影响。③水翁花提取物对氧化损伤的PC12神经细胞内、细胞外氧自由基水平的影响。结果:①水翁花提取物在浓度低于0．055 g／L时,对神经细胞有保护作用,在0．055-1．00 g／L浓度时,对细胞生长几乎无任何影响。②在低于 0．10g/L的浓度下,水翁花提取物对H2O2诱导的PC12神经细胞的氧化损伤没表现出明显的保护作用。但当浓度为1．00 g／L时,对H2O2诱导的PC12神经细胞的氧化损伤表现出明显的氧化修复能力。③H2O2损伤后,PC12细胞内、外氧自由基水平显著升高,当水翁花提取物浓度为 0．01g/L时,能明显的降低氧化损伤神经细胞内、外的氧自由基水平。结论:①水翁花水提物对H2O2诱导的PC12神经细胞的氧化损伤亦有很强的保护作用。②水翁花提取物抗氧化特性与提取液的浓度比有明显的关系,当浓度为1．00g/L时,具有明显的修复能力;当浓度为 0．01 g／L时能够降低细胞内外的氧自由基水平。