【摘 要】
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将腐败梭菌参考株增殖、鉴定，使用饱和硫酸铵沉淀法粗提腐败梭菌天然α毒素，并通过SDS-PAGE方法对其进行检测。将扩增的α毒素目的片段和经酶切的p ET-21a（+）载体同源重组，将构建好的重组质粒转入到BL21（DE3）感受态细胞中，并筛选阳性克隆株。在优化的表达条件下，对α毒素重组蛋白进行了大规模的表达。免疫BALB/c小鼠，取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，采用间接ELISA方法进行阳性杂
【基金项目】
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科技部“十三五”国家重点研发计划重点专项课题“羊梭菌病诊断和检测新技术研究”（2016YFD0500905）；
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将腐败梭菌参考株增殖、鉴定，使用饱和硫酸铵沉淀法粗提腐败梭菌天然α毒素，并通过SDS-PAGE方法对其进行检测。将扩增的α毒素目的片段和经酶切的p ET-21a（+）载体同源重组，将构建好的重组质粒转入到BL21（DE3）感受态细胞中，并筛选阳性克隆株。在优化的表达条件下，对α毒素重组蛋白进行了大规模的表达。免疫BALB/c小鼠，取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，采用间接ELISA方法进行阳性杂交瘤细胞筛选。制备及纯化腹水，进行效价、浓度、纯度及特异性测定。结果表明，本研究成功表达了可溶性腐败梭菌α毒素蛋白，大小约为46 kDa，筛选出的单抗3 E8和单抗6B12对重组蛋白效价检测结果均为1:256 000，对天然α毒素的效价检测结果均为1:128 000；纯度均已达到85%以上；单克隆抗体的浓度分别为3E8:2.27 mg/ml,6B12:1.96 mg/ml；均能够与腐败梭菌重组α毒素、天然α毒素特异性结合，而与产气荚膜梭菌α毒素无交叉反应。结论：得到特异性强、稳定性高的单抗3E8和单抗6B12，有助于腐败梭菌病的早期诊断及研究。
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