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[摘要] 目的: 建立测定益肾蠲痹丸中淫羊藿苷的高效液相色谱法。 方法: 用Kromasil KR 100-5-C18(5 m,4.6×250 mm)为色谱柱, 以乙腈-水(3:7)为流动相, 检测波长为270 nm。结果:该法简便、快速、准确性好。结论:该法适用于益肾蠲痹丸中淫羊藿苷含量的测定。
[关键词] 益肾蠲痹丸;淫羊藿苷;高效液相色谱法;含量
中图分类号:R927.2 文献标识码:A文章
益肾蠲痹丸是根据著名国医大师、名老中医朱良春几十年验方研制而成,其主要治疗骨科方面的疾病,具有温补肾阳、益肾壮督、搜风剔邪、蠲痹通络的作用,目前国内有两家企业生产。中医认为淫羊藿性辛、甘,温。归肝、肾经,有补肾阳,强筋骨,祛风湿的功效[1],其为益肾蠲痹丸中君药,淫羊藿苷又是淫羊藿中主要成份之一。
仪器与试药
高效液相色谱仪含LC-20AT泵及SDP-20AT紫外检测器(日本岛津);HT-230A型柱温箱;AUW-120D十万分之一电子天平;XO-5200DTD超声清洗机;乙腈为色谱纯;其他试剂均为分析纯;淫羊藿苷对照品(供含量测定用,样品号:0737-3709);益肾蠲痹丸(江苏正大清江制药有限公司提供,批号分别为:121001、121002、121003)
方法与结果
1 色谱条件与系统适应性
色谱柱:Kromasil KR 100-5-C18柱,5 m,4.6(i.d.)×250 mm(EKA CHEMICALS AB,瑞典,SN:E7075);流动相:乙腈-水(3:7);检测波长: 270 nm;柱温:30℃;流量:1.0 ml/min(柱压约1100 psi)。理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000,此条件下淫羊藿苷与其它组分的分离度应不低于1.5。
2 专属性
分别取淫羊藿对照药材及益肾蠲痹丸适量,精密称定,置25 ml量瓶中,加入甲醇约20 ml,60℃水浴中加热15分钟,取出,加热超声处理30分钟,室温放置过夜,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过。精密量取滤液1 ml,置5 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。另取淫羊藿苷对照品适量,精密称定,用甲醇溶解并稀释成1mg/ml的溶液。取淫羊藿苷对照品、淫羊藿对照药材及益肾蠲痹丸所配制溶液适量分别注入液相色谱仪,结果淫羊藿苷与其它组分能很好的分离。
3 标准曲线的绘制
精密称取淫羊藿苷对照品10.20 mg,用甲醇溶解并定容至10 ml,作为储备液。取上述溶液50 l、80 l、110 l、140 l、170 l、200 l,用甲醇稀釋并定容至10 ml,作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液20 l,注入高压液相仪,测定,以淫羊藿苷浓度x(g/ml)为横座标、峰面积值y(mv)为纵座标,绘制标准曲线,并用最小二乘法计算,得l回归方程为y=-32476+156585x,相关系数为R=0.9990。表明淫羊藿苷在5.1~20.4 g/ml范围内具有良好的线性关系。
4 供试品溶液的制备
取本品粗粉1 g,精密称定,置25 ml量瓶中,加入甲醇约25 ml,60℃水浴中加热15分钟,取出,加热超声处理30分钟,室温放置过夜,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过。精密量取滤液1 ml,置5 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
5 最低检测限度
按信噪比3:1计算,测定淫羊藿苷的最低检测限度分别为1.008 ng。
6 空白试验
取空白样品(按全处方去除淫羊藿配制而成)约1 g,取空白样品(按全处方去除淫羊藿配制而成)约1 g,精密称重,按“供试品溶液的制备”项下方法,制备样品溶液并进行测定,供试品中并无干扰测定的成分存在。
6 稳定性试验
精密吸取本品供试品溶液20 l,在室温下,每隔2进样,测定淫羊藿苷峰面积值,计算它们的相对标准差,结果12小时内淫羊藿苷平均峰面积为2236351,RSD(%)为0.23%,表明样品中淫羊藿苷含量在测定的12小时内保持稳定。
7 重现性试验
取本品供试品(批号为121001)约1 g,共6份,精密称重。按“供试品溶液的制备”项下方法,制备样品溶液并进行测定。结果表明本法测定的重现性良好RSD%为0.99%。
8 回收率试验
采用加样回收法,取已知(淫羊藿苷含量的益肾蠲痹丸(淫羊藿苷含量为1.56 mg/g)样品6份,各约0.5g,精密称重,分别加入淫羊藿苷对照品溶液(0.0853 mg/ml)10 ml,按“供试品溶液的制备”项下方法,提取并进行测定,按下式计算回收率。结果测得平均回收率为98.9%,RSD%为1.03%。结果表明本法具有良好的加样回收率。
9 样品测定
精密称取淫羊藿苷对照品10.20 mg,用甲醇溶解并稀释成约含1mg/ml的溶液,作对照品溶液,取20ul注入液相色谱仪,记录谱图。另取益肾蠲痹丸细粉,按“供试品溶液的制备”项下方法,制备样品溶液同法进行测定,按外标法以峰面积进行计算,121001、121002、121003三批样品中淫羊藿苷的含量分别为0.78mg/g、0.82mg/g和0.73mg/g。
讨 论
淫羊藿苷又是淫羊藿中有效成份之一,也是判断淫羊藿质量优劣重要指标之一。关于淫羊藿苷的测定方法报导非常多[2][3],但益肾蠲痹丸中的淫羊藿苷的测定还没人研究,所以对益肾蠲痹丸中的淫羊藿苷的测定方法进行研究是非常有意义的,也是必要的。本文主要用HPLC法对淫羊藿苷进行测定,结果证明是可行的,也是准确的。也有助于提高益肾蠲痹丸的质量。
[ 参 考 文 献 ]
[1] 中国药典2010年版.一部.
[2] 杨增明等. HPLC法测定淫羊藿苷含量研究. 中国药品标准
[3] 颜仁梁等. RP-HPLC测定益肾补血胶囊中淫羊藿苷、补骨脂素与异补骨脂素 中成药.
[关键词] 益肾蠲痹丸;淫羊藿苷;高效液相色谱法;含量
中图分类号:R927.2 文献标识码:A文章
益肾蠲痹丸是根据著名国医大师、名老中医朱良春几十年验方研制而成,其主要治疗骨科方面的疾病,具有温补肾阳、益肾壮督、搜风剔邪、蠲痹通络的作用,目前国内有两家企业生产。中医认为淫羊藿性辛、甘,温。归肝、肾经,有补肾阳,强筋骨,祛风湿的功效[1],其为益肾蠲痹丸中君药,淫羊藿苷又是淫羊藿中主要成份之一。
仪器与试药
高效液相色谱仪含LC-20AT泵及SDP-20AT紫外检测器(日本岛津);HT-230A型柱温箱;AUW-120D十万分之一电子天平;XO-5200DTD超声清洗机;乙腈为色谱纯;其他试剂均为分析纯;淫羊藿苷对照品(供含量测定用,样品号:0737-3709);益肾蠲痹丸(江苏正大清江制药有限公司提供,批号分别为:121001、121002、121003)
方法与结果
1 色谱条件与系统适应性
色谱柱:Kromasil KR 100-5-C18柱,5 m,4.6(i.d.)×250 mm(EKA CHEMICALS AB,瑞典,SN:E7075);流动相:乙腈-水(3:7);检测波长: 270 nm;柱温:30℃;流量:1.0 ml/min(柱压约1100 psi)。理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000,此条件下淫羊藿苷与其它组分的分离度应不低于1.5。
2 专属性
分别取淫羊藿对照药材及益肾蠲痹丸适量,精密称定,置25 ml量瓶中,加入甲醇约20 ml,60℃水浴中加热15分钟,取出,加热超声处理30分钟,室温放置过夜,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过。精密量取滤液1 ml,置5 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。另取淫羊藿苷对照品适量,精密称定,用甲醇溶解并稀释成1mg/ml的溶液。取淫羊藿苷对照品、淫羊藿对照药材及益肾蠲痹丸所配制溶液适量分别注入液相色谱仪,结果淫羊藿苷与其它组分能很好的分离。
3 标准曲线的绘制
精密称取淫羊藿苷对照品10.20 mg,用甲醇溶解并定容至10 ml,作为储备液。取上述溶液50 l、80 l、110 l、140 l、170 l、200 l,用甲醇稀釋并定容至10 ml,作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液20 l,注入高压液相仪,测定,以淫羊藿苷浓度x(g/ml)为横座标、峰面积值y(mv)为纵座标,绘制标准曲线,并用最小二乘法计算,得l回归方程为y=-32476+156585x,相关系数为R=0.9990。表明淫羊藿苷在5.1~20.4 g/ml范围内具有良好的线性关系。
4 供试品溶液的制备
取本品粗粉1 g,精密称定,置25 ml量瓶中,加入甲醇约25 ml,60℃水浴中加热15分钟,取出,加热超声处理30分钟,室温放置过夜,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过。精密量取滤液1 ml,置5 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
5 最低检测限度
按信噪比3:1计算,测定淫羊藿苷的最低检测限度分别为1.008 ng。
6 空白试验
取空白样品(按全处方去除淫羊藿配制而成)约1 g,取空白样品(按全处方去除淫羊藿配制而成)约1 g,精密称重,按“供试品溶液的制备”项下方法,制备样品溶液并进行测定,供试品中并无干扰测定的成分存在。
6 稳定性试验
精密吸取本品供试品溶液20 l,在室温下,每隔2进样,测定淫羊藿苷峰面积值,计算它们的相对标准差,结果12小时内淫羊藿苷平均峰面积为2236351,RSD(%)为0.23%,表明样品中淫羊藿苷含量在测定的12小时内保持稳定。
7 重现性试验
取本品供试品(批号为121001)约1 g,共6份,精密称重。按“供试品溶液的制备”项下方法,制备样品溶液并进行测定。结果表明本法测定的重现性良好RSD%为0.99%。
8 回收率试验
采用加样回收法,取已知(淫羊藿苷含量的益肾蠲痹丸(淫羊藿苷含量为1.56 mg/g)样品6份,各约0.5g,精密称重,分别加入淫羊藿苷对照品溶液(0.0853 mg/ml)10 ml,按“供试品溶液的制备”项下方法,提取并进行测定,按下式计算回收率。结果测得平均回收率为98.9%,RSD%为1.03%。结果表明本法具有良好的加样回收率。
9 样品测定
精密称取淫羊藿苷对照品10.20 mg,用甲醇溶解并稀释成约含1mg/ml的溶液,作对照品溶液,取20ul注入液相色谱仪,记录谱图。另取益肾蠲痹丸细粉,按“供试品溶液的制备”项下方法,制备样品溶液同法进行测定,按外标法以峰面积进行计算,121001、121002、121003三批样品中淫羊藿苷的含量分别为0.78mg/g、0.82mg/g和0.73mg/g。
讨 论
淫羊藿苷又是淫羊藿中有效成份之一,也是判断淫羊藿质量优劣重要指标之一。关于淫羊藿苷的测定方法报导非常多[2][3],但益肾蠲痹丸中的淫羊藿苷的测定还没人研究,所以对益肾蠲痹丸中的淫羊藿苷的测定方法进行研究是非常有意义的,也是必要的。本文主要用HPLC法对淫羊藿苷进行测定,结果证明是可行的,也是准确的。也有助于提高益肾蠲痹丸的质量。
[ 参 考 文 献 ]
[1] 中国药典2010年版.一部.
[2] 杨增明等. HPLC法测定淫羊藿苷含量研究. 中国药品标准
[3] 颜仁梁等. RP-HPLC测定益肾补血胶囊中淫羊藿苷、补骨脂素与异补骨脂素 中成药.