人角质形成细胞基因导入效率的影响因素研究

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目的了解不同大小质粒和不同基因转染法对人KC基因导入效率的影响。方法采用脂质体转染法、阳离子多聚物转染法、电穿孔联合细胞核转染试剂转染法、慢病毒感染法,分别将不同大小的质粒[pSUPER-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、pEGFP—N2、pHSER-绿色荧光蛋白(GFP)、ploxP-EGFP]导入人永生化KC株HaCaT细胞和人胚肾细胞株293FT细胞(后者为对照)。于倒置荧光显微镜下观察GFP的表达,计算转染率。结果(1)采用脂质体转染法可将4种质粒导入HaCaT细胞(转染率1.0%~3.3%)及293FT细胞(转染率80.0%~84.7%)。(2)阳离子多聚物转染法亦可将4种质粒导入HaCaT细胞(转染率为1.0%~3.7%)和293FT细胞(转染率81.3%~86.7%)。(3)采用电穿孔联合细胞核转染试剂转染法,可以将2种较小片段质粒pSUPER—EGFP和pEGFP-N2导入HaCaT细胞,转染率分别为22.3%和19.0%;而2种较大片段质粒pHSER-GFP和ploxP-EGFP的转染率分别为4.0%和3.3%。(4)pHSER-GFP经慢病毒包装后,导入HaCaT细胞的转染率高达97.0%,明显优于前3种转染法。结论脂质体转染法、阳离子多聚物转染法较难将外源性基因导入人KC,慢病毒感染法的转染率明显优于电穿孔联合细胞核转染试剂转染法;不同大小质粒对转染率有明显影响

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