【摘 要】
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为建立延边白鹅CD4与CD8基因在细胞免疫中的动态变化的检测方法,本研究根据CD4与CD8基因保守区分别设计两对特异性引物,在克隆目的基因的基础上,进行TA克隆和转化,构建的阳性
【机 构】
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延边大学农学院动物医学系,吉林延吉,133000
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为建立延边白鹅CD4与CD8基因在细胞免疫中的动态变化的检测方法,本研究根据CD4与CD8基因保守区分别设计两对特异性引物,在克隆目的基因的基础上,进行TA克隆和转化,构建的阳性质粒作为标准品,经反应条件优化建立了检测延边白鹅CD4与CD8基因的荧光定量PCR方法,并进行特异性、敏感性和重复性试验.结果 显示,建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法在质粒标准品稀释倍数为101～108倍(CD4:1.2×108拷贝/μL～1.2× 101拷贝/μL;CD8:1.8×108拷贝/μL～1.8×101拷贝/μL)范围内具有良好的线性关系,相关系数均为0.999,与其它相关鹅细胞因子基因不发生交叉反应,敏感性均是普通PCR的100倍,组内和组间变异系数均小于2％.初步应用本研究建立的方法检测鹅脾脏淋巴细胞CD4与CD8基因的转录水平,结果显示ConA可诱导目的基因转录水平升高,且显著高于PBS对照组(p＜0.05).本研究建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法为进一步研究鹅细胞免疫水平和CD4、CD8生物学活性奠定了基础.
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