【摘 要】
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背景:目前已有很多实验证明外周血中存在间充质干细胞,但由于所用分离筛选方法、培养条件的不同导致了结果的多样性,且实验可重复性较差.目的:观察表皮生长因子对体外分离培
【机 构】
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南京医科大学附属南京儿童医院新生儿医疗中心,江苏省南京市,210008
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背景:目前已有很多实验证明外周血中存在间充质干细胞,但由于所用分离筛选方法、培养条件的不同导致了结果的多样性,且实验可重复性较差.目的:观察表皮生长因子对体外分离培养的原代小鼠外周血间充质干细胞克隆形成的影响,以及外周血间充质干细胞传代后的多向分化潜能.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-10/2008-09在南京医科大学骨与干细胞研究中心完成.材料:雄性成年C57BL/6J小鼠16只,购于南京医科大学骨与干细胞研究中心实验动物中心.重组人表皮生长因子为Sigma公司产品.方法:无菌条件下从小鼠心脏采血,裂解红细胞后应用贴壁法分离外周血间充质干细胞,通过传代进行纯化和扩增.将原代细胞分2组进行体外培养,实验组向α-MEM培养液中加入10μg/L表皮生长凶子,对照组给予不含表皮生长因子的α-MEM培养液,16 d后行亚甲基蓝染色,计算克隆面积.取第3代外周血间充质干细胞,以1×104/cm2密度接种后,分别向成骨和脂肪方向诱导分化.主要观察指标:外周血间允质干细胞的牛长特性,外周血间充质干细胞体外诱导成骨、成脂能力.结果:倒置相差显微镜下,外周血间充质干细胞贴壁生长,形态类似于骨髓间充质干细胞,呈成纤维细胞样;但其形成克隆的时间较骨髓间充质下细胞有所推迟,凡原代细胞克隆形成率低于骨髓间充质干细胞:亚甲基蓝染色结果示实验组外周血间充质干细胞克隆形成率明显高于对照组(P＜0.05).外周血间充质干细胞成骨诱导后,碱性磷酸酶染色、总胶原染色及茜素红染色均呈强阳性;成脂诱导后油红染色里阳性,有一定数量的脂滴形成.结论:外周血中存在少量的间充质干细胞,能自我增殖,表皮生长因子可有效促进原代外周血间充质干细胞克隆的形成;体外分离培养的外周血间充质干细胞具备成骨和成脂分化特性.
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