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摘 要：建立反相高效液相色谱法测定头孢美唑钠原料中头孢美唑钠的含量。方法：采用安捷伦C18色谱柱（218mm×4.6mm，5μm），磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵5.75g，加水730毫升溶解，加10%四丁基氢氧化铵19.2毫升）-四氢呋喃-甲醇（730：12.5：300）（用磷酸调PH值至3.5），检测波长为254nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。头孢美唑钠在0.2～1.6mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。头孢美唑钠平均回收率分别为99.5%。结论：本法简便、准确，可用于头孢美唑钠原料中头孢美唑钠的含量测定。
关键词：头孢美唑钠原料；含量；测定
头孢美唑钠化学名称为（6R，7R）-7-[2-[（氰甲基）硫]乙酰氨基]-7-甲氧基-3-[（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫烷基甲基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-羧酸钠盐。头孢曲松钠上市已逾30年，至今仍是临床最常用的抗菌药物之一，我国将头孢曲松钠列为第三代头孢菌素类药物中的第一个基本药物。本实验采用高效液相色谱法对头孢美唑钠原料中的头孢美唑钠的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：实验室纯水机（厦门锐思捷科学仪器有限公司）；PC4006型四元梯度系统（天津市兰博实验仪器设备有限公司）；DL-820E超声波清洗机（上海高创化学科技有限公司）；752S紫外可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）；FA1004万分之一分析天平（上海书培实验设备有限公司）；赛多利斯PB-10酸度计（北京晨曦勇创科技有限公司）。
1.2 色谱柱：安捷伦 C18色谱柱（218 mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：头孢美唑钠 购自中国药品生物制品检定所。
1.4 试剂：甲醇（上海子钦化工有限公司）、醋酸钠（上海子钦化工有限公司）、磷酸二氢钠（大连立方化学技术有限公司）、磷酸二氢铵（上海子钦化工有限公司）、磷酸（南京化学试剂股份有限公司）、乙腈（大连立方化学技术有限公司）、四丁基氢氧化铵（大连立方化学技术有限公司）、四氢呋喃（南京化学试剂股份有限公司）。
1.5 试药：头孢美唑钠原料
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。流动相：磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵5.75g，加水730毫升溶解，加10%四丁基氢氧化铵19.2毫升）-四氢呋喃-甲醇（730：12.5：300）（用磷酸调PH值至3.5），检测波长：254nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按头孢美唑钠峰计算应不得低于2000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取头孢美唑钠对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含0.8mg的溶液，即得。
2.3 供試品溶液的制备
取头孢美唑钠原料适量，加10ml流动相，密塞，精密称定重量，超声波振荡提取10分钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.4 专属性试验
分别精密吸取头孢美唑钠对照品溶液、供试品样品溶液、和高温、光照、酸碱和氧化的强制降解样品溶液各10μL注入液相色谱仪，按“2.1色谱条件”下方法进行分析，记录色谱图。结果在该色谱条件下所有强制的条件下降解产物与头孢美唑钠的峰相同保留时间处不存在吸收峰，说明此方法具有较强的专属性。
2.5 精密度试验
精密称取头孢美唑钠对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为0.8mg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.67%，表明本方法精密度良好。
2.6 对照品的线性考察
精密称取头孢美唑钠对照品100mg，置50ml容量瓶中，加入流动相溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0mL，置于10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归。结果表明，头孢美唑钠在0.2～1.6mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7 重现性试验
称取同一批的头孢美唑钠原料样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.63%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 准确度试验
精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的头孢美唑钠对照品，上述方法进行测定，计算回收率，平均回收率为99.5%，RSD=0.72%。结果表明此方法的回收率良好。
2.9 样品稳定性试验
取同一批头孢美唑钠原料样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、2、4、6、8小时，精密吸取供试品溶液10？滋l 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定头孢美唑钠原料中头孢美唑钠的RSD=0.66%。结果表明供试品8小时内稳定。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定头孢美唑钠原料三批样品中头孢美唑钠的含量，结果三批样品的含量分别为90.3%、89.6%、90.5%。
3 讨论
分别考察0.02mol/L正辛胺的水-乙腈（73∶27，用磷酸调pH值为4.0），磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵5.75g，加水730毫升溶解，加10%四丁基氢氧化铵19.2毫升）-四氢呋喃-甲醇（730：12.5：300）（用磷酸调PH值至3.5），0.01mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH至3.5）-甲醇-乙腈（80：10：10）不同比例的流动相，结果以磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵5.75g，加水730毫升溶解，加10%四丁基氢氧化铵19.2毫升）-四氢呋喃-甲醇（730：12.5：300）（用磷酸调PH值至3.5）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵5.75g，加水730毫升溶解，加10%四丁基氢氧化铵19.2毫升）-四氢呋喃-甲醇（730：12.5：300）（用磷酸调PH值至3.5）为流动相为流动相。本实验表明此方法可用于头孢美唑钠原料中头孢美唑钠的含量测定。
参考文献
[1]黄英，梁茂植，余勤，蒋雷，石应康.血浆头孢曲松HPLC测定法及其在胸外术后患者的应用[J].中国抗生素杂志，2000（2）.
[2]李方，胡燕锋，陈敏玲.高效液相色谱法测定人血浆中头孢曲松的含量[J].中国医院药学杂志，2006（3）.
[3]刘英，杨淑先.高效液相色谱法测定注射用头孢曲松钠三唑巴坦钠的含量[J].中国药学杂志，2005（20）.
[4]汤玮珉，薛佩华.头孢曲松钠粉针剂配液的稳定性观察[J].药学服务与研究，2002（3）.
[5]李军，黄萍，谢元超，于力，单红宾.用HPLC法测定头孢曲松钠、头孢噻肟钠、头孢哌酮钠聚合物[J].中国药品标准，2002（3）.
关键词：头孢美唑钠原料；含量；测定
头孢美唑钠化学名称为（6R，7R）-7-[2-[（氰甲基）硫]乙酰氨基]-7-甲氧基-3-[（1-甲基-1H-四唑-5-基）硫烷基甲基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-羧酸钠盐。头孢曲松钠上市已逾30年，至今仍是临床最常用的抗菌药物之一，我国将头孢曲松钠列为第三代头孢菌素类药物中的第一个基本药物。本实验采用高效液相色谱法对头孢美唑钠原料中的头孢美唑钠的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：实验室纯水机（厦门锐思捷科学仪器有限公司）；PC4006型四元梯度系统（天津市兰博实验仪器设备有限公司）；DL-820E超声波清洗机（上海高创化学科技有限公司）；752S紫外可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）；FA1004万分之一分析天平（上海书培实验设备有限公司）；赛多利斯PB-10酸度计（北京晨曦勇创科技有限公司）。
1.2 色谱柱：安捷伦 C18色谱柱（218 mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：头孢美唑钠 购自中国药品生物制品检定所。
1.4 试剂：甲醇（上海子钦化工有限公司）、醋酸钠（上海子钦化工有限公司）、磷酸二氢钠（大连立方化学技术有限公司）、磷酸二氢铵（上海子钦化工有限公司）、磷酸（南京化学试剂股份有限公司）、乙腈（大连立方化学技术有限公司）、四丁基氢氧化铵（大连立方化学技术有限公司）、四氢呋喃（南京化学试剂股份有限公司）。
1.5 试药：头孢美唑钠原料
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。流动相：磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵5.75g，加水730毫升溶解，加10%四丁基氢氧化铵19.2毫升）-四氢呋喃-甲醇（730：12.5：300）（用磷酸调PH值至3.5），检测波长：254nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按头孢美唑钠峰计算应不得低于2000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取头孢美唑钠对照品适量，置容量瓶中，加流动相制成每1mL含0.8mg的溶液，即得。
2.3 供試品溶液的制备
取头孢美唑钠原料适量，加10ml流动相，密塞，精密称定重量，超声波振荡提取10分钟，放冷，精密称定，用流动相补足重量，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
2.4 专属性试验
分别精密吸取头孢美唑钠对照品溶液、供试品样品溶液、和高温、光照、酸碱和氧化的强制降解样品溶液各10μL注入液相色谱仪，按“2.1色谱条件”下方法进行分析，记录色谱图。结果在该色谱条件下所有强制的条件下降解产物与头孢美唑钠的峰相同保留时间处不存在吸收峰，说明此方法具有较强的专属性。
2.5 精密度试验
精密称取头孢美唑钠对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为0.8mg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.67%，表明本方法精密度良好。
2.6 对照品的线性考察
精密称取头孢美唑钠对照品100mg，置50ml容量瓶中，加入流动相溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0mL，置于10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算回归。结果表明，头孢美唑钠在0.2～1.6mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.7 重现性试验
称取同一批的头孢美唑钠原料样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.63%，结果表明此方法的重现性良好。
2.8 准确度试验
精密称取已知含量的样品6份，分别加入一定量的头孢美唑钠对照品，上述方法进行测定，计算回收率，平均回收率为99.5%，RSD=0.72%。结果表明此方法的回收率良好。
2.9 样品稳定性试验
取同一批头孢美唑钠原料样品，按2.3项下的供试品制备方法制备供试品，将供试品置室温下放置，分别于第0、2、4、6、8小时，精密吸取供试品溶液10？滋l 注入液相色谱仪中，记录色谱图。测定头孢美唑钠原料中头孢美唑钠的RSD=0.66%。结果表明供试品8小时内稳定。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定头孢美唑钠原料三批样品中头孢美唑钠的含量，结果三批样品的含量分别为90.3%、89.6%、90.5%。
3 讨论
分别考察0.02mol/L正辛胺的水-乙腈（73∶27，用磷酸调pH值为4.0），磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵5.75g，加水730毫升溶解，加10%四丁基氢氧化铵19.2毫升）-四氢呋喃-甲醇（730：12.5：300）（用磷酸调PH值至3.5），0.01mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调pH至3.5）-甲醇-乙腈（80：10：10）不同比例的流动相，结果以磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵5.75g，加水730毫升溶解，加10%四丁基氢氧化铵19.2毫升）-四氢呋喃-甲醇（730：12.5：300）（用磷酸调PH值至3.5）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用磷酸二氢铵溶液（取磷酸二氢铵5.75g，加水730毫升溶解，加10%四丁基氢氧化铵19.2毫升）-四氢呋喃-甲醇（730：12.5：300）（用磷酸调PH值至3.5）为流动相为流动相。本实验表明此方法可用于头孢美唑钠原料中头孢美唑钠的含量测定。
参考文献
[1]黄英，梁茂植，余勤，蒋雷，石应康.血浆头孢曲松HPLC测定法及其在胸外术后患者的应用[J].中国抗生素杂志，2000（2）.
[2]李方，胡燕锋，陈敏玲.高效液相色谱法测定人血浆中头孢曲松的含量[J].中国医院药学杂志，2006（3）.
[3]刘英，杨淑先.高效液相色谱法测定注射用头孢曲松钠三唑巴坦钠的含量[J].中国药学杂志，2005（20）.
[4]汤玮珉，薛佩华.头孢曲松钠粉针剂配液的稳定性观察[J].药学服务与研究，2002（3）.
[5]李军，黄萍，谢元超，于力，单红宾.用HPLC法测定头孢曲松钠、头孢噻肟钠、头孢哌酮钠聚合物[J].中国药品标准，2002（3）.