目的 构建肌凝蛋白轻链-2(MLC-2v)启动下HIF-1 α及人NIS慢病毒真核表达载体,探讨外源基因在心肌细胞中的特异性表达和NIS作为报告基因的可行性.方法 应用基因重组技术构建慢病毒(Lv)-延长因子(EF) 1-HIF-1α-内部核糖体进入位点(IRES)-NIS及Lv-MLC-HIF-1α-IRES-NIS慢病毒表达载体.对重组质粒进行酶切、测序鉴定后,采用脂质体转染法将重组质粒转入Hela细胞.细胞免疫荧光及Western blot分别验证HIF-1α及NIS蛋白在细胞中的定位及定量表达;制备重组病毒,分别以不同的感染复数(MOI)感染H9C2大鼠心肌细胞、NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞和L6大鼠骨骼肌成肌细胞,Western blot确定最佳MOI并验证MLC-2v启动子的特异性;分别行H9C2细胞动态摄碘和NaClO4抑制实验.采用两样本t检验分析数据.结果 成功构建Lv-EF1-HIF-1α-IRES-NIS及Lv-MLC-HIF-1 α-IRES-NIS慢病毒表达载体.2种质粒分别转染Hela细胞,免疫荧光显示HIF-1α蛋白表达于胞质,NIS蛋白表达于胞膜;Western blot显示EF1启动下2种蛋白质的表达量多于MLC-2v启动下相应表达.Western blot蛋白检测后测定蛋白灰度值,阳性对照组NIS及HIF-1α灰度值分别为69.8和71.9,EF1启动下分别为109.4和92.7,MLC-2v启动下分别为141.9和132.4.Lv-MLC-HIF-1α-IRES-NIS病毒感染H9C2细胞,MOI为20时NIS蛋白表达最高,为最佳MOI.2种病毒以MOI为20分别感染H9C2、NIH-3T3及L6细胞,Western blot显示EF1启动下NIS蛋白在3种细胞中均有表达,灰度值分别为23.4、29.8和28.6,相差较小.MLC-2v启动下仅H9C2细胞中有大量NIS蛋白表达,NIS蛋白在H9C2、L6及NIH-3T3细胞的灰度值分别为157.9、178.8和217.3.H9C2细胞的摄碘高峰时间为40 min,峰值为4 287.2计数·min-1,是阴性对照组(254.4计数·min-1)的16.85倍(t=5.34,P＜0.01).摄碘可被NaClO4抑制,抑制率达85.5％(t =21.3,P＜0.01).结论 MLC-2v可启动治疗基因HIF-1α及报告基因NIS在心肌细胞中特异性表达,表达的NIS蛋白具有摄碘功能,为NIS作为报告基因监测外源基因的靶向治疗奠定了基础。