【摘 要】
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[目的]获取高灵敏度的玉米赤霉醇(zearalanol,ZAL)单克隆抗体,为提高玉米赤霉醇免疫学检测方法灵敏度研究奠定基础.[方法]利用ZAL的结构类似物玉米赤霉酮(zearalanone,ZAN)制
【机 构】
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河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,郑州,450002河南农业大学生命科学学院,郑州,450002;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室,郑州450002;河南农业大学,郑州450002;
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[目的]获取高灵敏度的玉米赤霉醇(zearalanol,ZAL)单克隆抗体,为提高玉米赤霉醇免疫学检测方法灵敏度研究奠定基础.[方法]利用ZAL的结构类似物玉米赤霉酮(zearalanone,ZAN)制备人工完全抗原.肟化改造ZAN得到ZAN-O;碳二亚胺(EDC)法把ZAN-O分别连接到牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上制备出ZAN-O-BSA和ZAN-O-OVA.ZAN-O-BSA免疫小鼠,免疫剂量为50 μg蛋白/只鼠.选取血清效价高、灵敏度好的小鼠进行细胞融合.阳性杂交瘤筛选过程中,利用ZAL替代ZAN作为阻断剂,筛选能分泌抗ZAL单克隆抗体的杂交瘤细胞.体内诱生腹水法来批量制备ZAL单抗,并对单抗的免疫学性能进行了鉴定.[结果]通过细胞融合,阳性杂交瘤筛选得到了1株能分泌抗ZAL单克隆抗体的杂交瘤细胞,命名为12B10A7,其分泌的ZAL单抗灵敏度(半数抑制浓度,IC50)为577 pg·mL-1,亲和力常数Ka=6.21×l07L·mol-1,与结构类似物β-玉米赤霉醇(β-zearalanol,β-ZAL)、α-玉米赤霉烯醇(α-zearalenol,α-ZEL)、β-玉米赤霉烯醇(β-zearalenol,β-ZEL)、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)分别有43.06％、15.51％、15.22％、77.65％及9.79％的交叉反应率,而与其他霉菌毒素及载体蛋白交叉反应率均＜0.06％.[结论]基于抗体交叉反应特性,利用ZAN制备人工抗原,得到了ZAL的单克隆抗体,所制备的单克隆抗体亲和力高,灵敏度好,特异性强.
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