【摘 要】
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本试验旨在研究柴胡皂苷a(SSa)和柴胡皂苷d(SSd)对热诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)抗氧化能力和热休克蛋白基因表达的影响.以38℃培养的BMECs作为阴性对照组;高温42℃分别培养BMECs 1、4、8、12和24 h,建立热应激模型(阳性对照组);BMECs培养基中分别添加0.1、1.0μmol/L SSa和0.01、0.10μmol/L SSd,38℃培养4 h(SSa和SSd作用细胞时间)后,42℃分别处理1、4、8、12和24 h(处理组).测定各组BMECs中超氧化物歧化酶(SOD)
【机 构】
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安徽农业大学动物科技学院,合肥 230036;上海城建职业学院,上海 201415;光明牧业有限公司,上海 200436
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本试验旨在研究柴胡皂苷a(SSa)和柴胡皂苷d(SSd)对热诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)抗氧化能力和热休克蛋白基因表达的影响.以38℃培养的BMECs作为阴性对照组;高温42℃分别培养BMECs 1、4、8、12和24 h,建立热应激模型(阳性对照组);BMECs培养基中分别添加0.1、1.0μmol/L SSa和0.01、0.10μmol/L SSd,38℃培养4 h(SSa和SSd作用细胞时间)后,42℃分别处理1、4、8、12和24 h(处理组).测定各组BMECs中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH?Px)和过氧化氢酶(CAT)活性及培养液中丙二醛(MDA)含量,并检测细胞中热休克转录因子-1(HSF?1)和热休克蛋白70(HSP70)mRNA相对表达量.结果表明:与阴性对照组相比,阳性对照组BMECs中SOD和GSH?Px活性显著降低(P<0.05),培养液中MDA含量在热诱导4 h时显著升高(P<0.05),HSF?1和HSP70 mRNA相对表达量显著上调(P<0.05).与阳性对照组相比,任意浓度的SSa均能够显著提高热诱导1 h时BMECs中SOD活性(P<0.05);热诱导4、8和24 h时,0.1μmol/L SSa组BMECs中CAT活性显著提高(P<0.05);0.01μmol/L SSd在热诱导1、4、8、12和24 h时能显著提高BMECs中GSH?Px的活性(P0.05),或者显著降低了以上抗氧化酶的活性(P<0.05),且在热诱导12 h时0.1μmol/L SSd组培养液中MDA含量显著升高(P<0.05),表明SSa和SSd对BMECs氧化应激的缓解作用存在剂量和时间依赖性.在热诱导1 h时,各处理组BMECs中HSP70 mRNA相对表达量较阳性对照组显著上调(P<0.05);在热诱导4 h时,0.1μmol/L SSa处理组BMECs中HSF?1和HSP70 mRNA相对表达量较阳性对照组显著上调(P<0.05);在热诱导12和24 h时,0.01μmol/L SSd处理组BMECs中HSP70 mRNA相对表达量较阳性对照组显著上调(P<0.05).综上所述,42℃热处理可诱导BMECs氧化应激,适宜浓度的SSa和SSd能够缓解热诱导BMECs的氧化应激,其中0.1μmol/L SSa和0.01μmol/L SSd对42℃热诱导条件下BMECs的氧化应激有较好的缓解作用,并可提高HSF?1和HSP70基因的表达,保护BMECs免受高温诱导的损伤.
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