【摘 要】
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目的 构建针对大鼠核因子(NF)-κB的腺病毒,采用RNA干扰方法观察其对内毒素诱导的大鼠肝枯否细胞(KC)NF-κB抑制和肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6释放的影响.方法
【机 构】
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第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科,上海,200438解放军胸心外科研究所;
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目的 构建针对大鼠核因子(NF)-κB的腺病毒,采用RNA干扰方法观察其对内毒素诱导的大鼠肝枯否细胞(KC)NF-κB抑制和肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6释放的影响.方法 合成双链寡核苷酸siNF-κB克隆人pShuttleH1载体,取0.5μg线性化后的pShuttleH1-siNF-κB电转化BJ5183感受态细菌获取重组腺病毒骨架质粒;取线性化的重组质粒4μg利用Lipo-fectamineTM2000转染骨架质粒至HEK 293细胞获取重组腺病毒Ad-siNF-κB;TCID50法测定病毒滴度;腺病毒以MOI=10感染原代培养大鼠肝枯否细胞,观察对内毒素诱导的NF-κB抑制和TNF-α、IL-6释放的影响.结果 目的 基因成功克隆入腺病毒,病毒滴度为5.32×109pfu/ml.转染腺病毒Ad-siNF-κB后的内毒素诱导的肝KC及NF-κB mRNA及TNF-α、IL-6的表达均明显减弱.结论 成功构建表达NF-κB siRNA的腺病毒,具有良好的抑制NF-κB和TNF-α、IL-6的作用.
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