探讨依托咪酯对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导心肌细胞炎症、凋亡的影响及其可能作用机制。
方法将体外培养的大鼠心肌细胞H9c2采用随机数字表法分为5组(每组3个复孔,每组实验重复3次):正常对照组(Con组)、脂多糖组(LPS组)、脂多糖 20 μmol/L依托咪酯组(E-L组)、脂多糖 50 μmol/L依托咪酯组(E-M组)、脂多糖 100 μmol/L依托咪酯组(E-H组)。Con组正常培养,LPS组加入含浓度1 mg/L LPS的杜氏改良培养基(dulbecco's modified eagle medium, DMEM)培养24 h,E-L组、E-M组、E-H组分别使用不同浓度(20、50、100 μmol/L)依托咪酯与1 mg/L LPS的DMEM培养液培养24 h。再次选取正常培养的心肌细胞采用随机数字表法分为两组(每组3个复孔,每组实验重复3次):脂多糖 100 μmol/L依托咪酯 anti-微RNA(microRNA, miR)-NC组(anti-miR-NC组)和脂多糖 100 μmol/L依托咪酯 anti-miR-214-3p组(anti-miR-214-3p组)。anti-miR-NC组和anti-miR-214-3p组分别将anti-miR-NC和anti-miR-214-3p转染至心肌细胞,加入含有100 μmol/L依托咪酯与1 mg/L LPS的DMEM培养液培养24 h。ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1β水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)检测miR-214-3p与转导素β1X连锁受体蛋白质1(transducin β-like 1X related protein 1, TBL1XR1)的表达量,双荧光素酶报告实验验证miR-214-3p与TBL1XR1的靶向调控关系,Western blot法检测TBL1XR1、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)相关蛋白(Bcl-2-associated X protein, Bax)、Bcl-2的表达量。
结果与Con组比较,LPS组TNF-α、IL-6、IL-1β、Bax水平以及细胞凋亡率、TBL1XR1 mRNA表达升高(P