【摘 要】
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新城疫病毒（NDV）通过启动不依赖p53的内源性凋亡通路特异性诱导肿瘤细胞凋亡。最新研究表明NDV可以引起U251肿瘤细胞发生自噬,并在后期导致细胞凋亡,但其机理尚不清楚。本研究通过反向遗传操作技术对NDV Clone30疫苗株F蛋白的碱性裂解位点进行突变,将F蛋白的裂解位点由弱毒株的GGRQGR↓L突变为强毒株的GRRQRR↓F基序,并成功拯救出突变改造病毒rC30-FmF。分别将Clone30
【机 构】
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东北农业大学生命科学学院/生物制药学教研室
【基金项目】
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黑龙江省青年基金（QC2012C099）； 东北农业大学博士启动基金（2012RCB43）；
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新城疫病毒（NDV）通过启动不依赖p53的内源性凋亡通路特异性诱导肿瘤细胞凋亡。最新研究表明NDV可以引起U251肿瘤细胞发生自噬,并在后期导致细胞凋亡,但其机理尚不清楚。本研究通过反向遗传操作技术对NDV Clone30疫苗株F蛋白的碱性裂解位点进行突变,将F蛋白的裂解位点由弱毒株的GGRQGR↓L突变为强毒株的GRRQRR↓F基序,并成功拯救出突变改造病毒rC30-FmF。分别将Clone30野生型病毒株rC30-wt与rC30-FmF感染HepG2肝癌细胞,通过透射电镜检测细胞超微结构显示,rC30-FmF感染4 h后细胞内出现大量自噬小体及自噬溶酶体。通过western blot检测自噬标志蛋白LC-3 II表明,rC30-FmF感染4 h后LC3II表达量显著上调,与rC30-wt对照组相比差异极显著（p＜0.01）。研究表明,rC30-FmF可以在感染早期增加HepG2细胞自噬程度。从而初步证明F蛋白的裂解位点在诱导HepG2细胞自噬过程中具有关键作用。
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