【摘 要】
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瘦素(leptin)蛋白由肥胖基因编码,对人体能量代谢等多种生理过程起着重要的调节作用.利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将人瘦素蛋白基因(lep)克隆到杆状病毒转移栽体pFastBac
【机 构】
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江苏科技大学,中国农业科学院蚕业研究所
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划);国家自然科学基金
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瘦素(leptin)蛋白由肥胖基因编码,对人体能量代谢等多种生理过程起着重要的调节作用.利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将人瘦素蛋白基因(lep)克隆到杆状病毒转移栽体pFastBacHTb,并转化E.coli DH10Bac,获得重组杆粒Bacmidlep,然后转染家蚕BmN细胞,获得重组杆状病毒.用SDS-PAGE和Western blotting方法在感染重组病毒的家蚕BmN细胞检测到大小约22kD的蛋白条带,与预期的人瘦素蛋白分子质量相符.给家蚕5龄起蚕注射重组病毒液后的4～5 d出现发病症状,RT-PCR检测发病家蚕的血液中有lep基因转录,并通过SDS-PAGE和Western blotting检测到大小为22kD的人瘦素蛋白的表达.研究结果表明,利用Bac-to-Bac表达系统能够获得含有人瘦素蛋白基因的重组杆状病毒,并且目的蛋白能在家蚕细胞及幼虫体内表达.
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