人隐孢子虫RT—PCR—ELISA检测方法的建立

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目的建立一种高度敏感和特异的人隐孢子虫的RT—PCR—ELISA检测方法。方法根据人隐孢子虫与其他恣孢子虫粘附蛋白p23基因的多重比对,设计一对引物(其中pl引物带有生物素标记)用来扩增含高变区目的片段;采用RT-PCR方法扩增目的片段,扩增产物与探针引物进行液相杂交,将杂交产物与微孔板上包被的链霉亲和素结合,再与辣根过氯化酶标记的抗地高辛抗体反应。用所建立的方法对22份临床样本进行检测,并与常规检测方法进行比较。结果所建立的RT—PCR-ELISA检测方法具有高特异性和敏感性,比常规的PCR方法灵敏度提
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