【摘 要】
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目的建立氧化应激模型,探讨新基因JWA参与细胞氧化应激的机制.方法用H2O2处理人乳腺癌细胞株(MCF-7)和人胚胎肺纤维细胞株(WI-38)两种细胞,观察细胞培养上清中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,用RT-PCR半定量的方法及Western blot蛋白质印迹法分别检测JWA在mRNA水平和蛋白质水平上的表达以及应激蛋白HSP27、HSP70、HSP90的表达.结果MCF-7
【机 构】
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4430003,宜昌,三峡大学医学院预防医学教研室,南京医科大学公共卫生学院应用毒理研究所,
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目的建立氧化应激模型,探讨新基因JWA参与细胞氧化应激的机制.方法用H2O2处理人乳腺癌细胞株(MCF-7)和人胚胎肺纤维细胞株(WI-38)两种细胞,观察细胞培养上清中丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,用RT-PCR半定量的方法及Western blot蛋白质印迹法分别检测JWA在mRNA水平和蛋白质水平上的表达以及应激蛋白HSP27、HSP70、HSP90的表达.结果MCF-7细胞培养上清中H2O2处理前MDA为(0.531±0.038)mmol/L,处理后为(0.674±0.041)mmol/L,差异有显著性(P＜0.01);GSH在H2O2处理前为(0.053±0.002)g/L,处理后为(0.044±0.002)g/L,差异有显著性(P＜0.01).WI-38细胞培养上清中H2O2处理前MDA的含量为(0.572±0.035)mmol/L,处理后为(0.683±0.028)mmol/L,差异有显著性(P＜0.01);H2O2处理前GSH含量为(0.058±0.002)g/L,处理后为(0.050±0.002)g/L,差异有显著性(P＜0.01).经H2O2孵育不同时间后,JWA mRNA在MCF-7细胞中明显下降,6 h下降68.4%,在WI-38细胞中则变化不明显;JWA蛋白和HSP27在两种细胞中的表达水平都有明显增加,但增加的程度不同.结论JWA基因参与细胞氧化应激且在不同类型的细胞中作用机制不同;JWA蛋白可能是一种与HSP27作用有关的蛋白.
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