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为了建立梨树苹果褪绿叶斑病毒原位RT-PCR检测技术,用已知带有苹果褪绿叶斑病毒的库尔勒香梨和无病毒实生苗叶片为材料,利用DIG标记,研究了香梨病毒的叶片石蜡切片IS-RT-PCR检测技术。包括AMV逆转录酶、dNTPs、RNasin及互补引物浓度对cDNA合成的影响,退火温度、TaqDNA聚合酶、Mg^2+、引物浓度及循环次数对原位PCR效果的影响。结果表明:RNasin的用量大于0.2U·μL^-1时,信号强度随着RNasin量的加大而增强;只有当dNTPs浓度达1.0mmol·L