【摘 要】
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目的建立用荧光定量PCR方法检测大鼠bFGF基因mRNA水平。方法以Trizol一步法提取新鲜骨组织总RNA，以Oligo（dt）18为引物逆转录产生cDNA并进行扩增，以T-A克隆法将纯化的目的片断与PG
【机 构】
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天津医科大学代谢病医院内分泌研究所卫生部与天津市激素与发育重点实验室
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目的建立用荧光定量PCR方法检测大鼠bFGF基因mRNA水平。方法以Trizol一步法提取新鲜骨组织总RNA，以Oligo（dt）18为引物逆转录产生cDNA并进行扩增，以T-A克隆法将纯化的目的片断与PGEM—T Easy载体连接成重组质粒并转化E．coli DH5α。采用碱裂解法提取重组质粒，经蓝白筛选、酶切、测序鉴定后，根据标准品建立标准曲线，由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA准确含量，并以靶基因和内参GAPDH mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果由PGEM-T Easy—b
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