高效液相色谱-荧光法测定血清犬尿喹啉酸和色氨酸方法的建立

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目的 建立同时检测血清犬尿喹啉酸(kynurenic acid,KYNA)和色氨酸(tryptophan,Trp)的高效液相色谱-荧光法.方法 采用高效液相色谱在线衍生技术,通过对最佳检测波长、流速、流动相中醋酸锌浓度和乙腈比例等因素的探讨,得出测定Trp和KYNA的最优实验方案,并对其进行方法学评价;测定50名正常人血清KYNA和Trp含量.结果 KYNA保留时间约为8.1 min,线性范围为1.05~2 093 nmol/L,最低检出浓度为0.05 nmol/L,平均回收率为101.19%;Trp保留时间约为11.3 min,线性范围为0.49~196 μmol/L,最低检出浓度为0.001 μmol/L,平均回收率为104.43%,二者日内、日间测定的变异系数均小于5%,苯丙氨酸、酪氨酸、5-羟色胺和犬尿氨酸等物质对该法均无干扰.健康成人血清KYNA和Trp含量分别为(24.25±9.11)nmol/L和(49.05±11.67)μmol/L.结论 建立的方法简便、快速、稳定、可行,适用于临床和科研工作。

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