【摘 要】
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从牛肺巨噬细胞cDNA文库中扩增编码牛IgG Fc受体Ⅱ(boFcγRⅡ)胞外区基因,PCR产物经EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切后,插入原核表达载体pET28a的T7启动子下游,构建重组表达质粒pETboR
【机 构】
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河南省动物免疫学重点实验室,河南,郑州,450002
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从牛肺巨噬细胞cDNA文库中扩增编码牛IgG Fc受体Ⅱ(boFcγRⅡ)胞外区基因,PCR产物经EcoR Ⅰ和HindⅢ双酶切后,插入原核表达载体pET28a的T7启动子下游,构建重组表达质粒pETboRⅡ.以pETboRⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.SDS-PAGE分析诱导表达菌体可见分子量约为27kDa的蛋白条带,该表达蛋白在细胞质中主要以不溶性包涵体形式存在.Western blotting和Dot blot检测表明,boFcγRⅡ重组蛋白在变性条件下可与牛IgG特异结合,提示牛FcγRⅡ胞外区可能存在IgG线性结合表位.
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