【摘 要】
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目的 以细胞周期特异性T淋巴细胞型白血病Molt-4细胞S期凋亡为模式,检测细胞周期蛋白依赖性激酶1( CDK1)在S期细胞周期检测点蛋白磷酸化及蛋白去磷酸化,探讨细胞周期时相特异性细胞凋亡的CDK1的活性改变.方法 对数生长期的人类急性淋巴细胞白血病细胞系Molt-4经喜树碱(CPT)诱导细胞凋亡,经不同的作用时间、剂量处理后,以API法检测细胞凋亡的细胞周期特异性,以分选后激光共聚焦荧光显微镜
【机 构】
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430050武汉市第五医院肿瘤科,430050武汉市第五医院普外科,430050武汉市第五医院普外科,430050武汉市第五医院肿瘤科,华中科技大学同济医学院肿瘤研究所
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目的 以细胞周期特异性T淋巴细胞型白血病Molt-4细胞S期凋亡为模式,检测细胞周期蛋白依赖性激酶1( CDK1)在S期细胞周期检测点蛋白磷酸化及蛋白去磷酸化,探讨细胞周期时相特异性细胞凋亡的CDK1的活性改变.方法 对数生长期的人类急性淋巴细胞白血病细胞系Molt-4经喜树碱(CPT)诱导细胞凋亡,经不同的作用时间、剂量处理后,以API法检测细胞凋亡的细胞周期特异性,以分选后激光共聚焦荧光显微镜技术( PSC)对API结果进一步验证,从而获取最佳条件下细胞周期特异性细胞凋亡,蛋白电泳分析法检测CDK1的磷酸化、去磷酸化.结果 对数生长期的Molt-4细胞经CTP诱导后发生细胞周期特异性细胞凋亡,CPT 0.2 μg/ml处理后6h出现S期特异性细胞凋亡.CTP诱导出现S期特异性细胞凋亡时CDK1-第15位酪氨酸(Tyr15)与对照Western blot结果条带相近,而CDK1-第161位苏氨酸( Thr161)条带较窄.结论 细胞凋亡往往伴有细胞周期特异性；经PSC形态学证实的API流式细胞术是有效、快捷的细胞周期特异性细胞凋亡分析方法；CDK1在S期特异性细胞凋亡时磷酸化活性降低。
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