建立无需抽提RNA直接以血浆中的microRNAs(miRNAs)作为模板进行实时荧光定量PCR检测的新方法。方法方法学建立。采集健康人EDTA-K₂抗凝静脉血并分离血浆，取7.5 μl血浆用等量含2.5%(体积比)Tween20的缓冲液处理后进行逆转录及PCR，建立血浆miRNAs直接检测法。用该方法检测健康人血浆标本中U6 snRNA、miR-24-1-5p和miR-4634表达水平，评估其扩增的特异性和扩增效率。同时与传统的抽提RNA定量PCR检测法的阈值循环数（Cq）值进行比较并作相关性分析。另外，应用建立的血浆直接检测法，比较了混合引物和单个引物逆转录法检测健康人血浆标本中U6 snRNA、miR-24-1-5p和miR-4634结果的一致性。结果血浆直接检测法融解曲线显示健康人血浆标本中U6、miR-24-1-5p和miR-4634扩增产物分别在81、83、84.2 ℃时出现单一峰，无引物二聚体峰和其他非特异峰出现。血浆直接检测法检测miR-24-1-5p扩增效率为1.1，同一份样本中U6、miR-24-1-5p和miR-4634这3种基因的扩增曲线平行，说明扩增斜率一致。直接检测法检测miR-4634的Cq值为30.98±0.17，高于RNA抽提法的29.22±0.21，差异有统计学意义（t=8.475，P<0.01），而2种方法检测U6（直接检测法32.43±0.08，RNA抽提法32.57±0.06；t=1.354，P>0.05）、miR-24-1-5p(直接检测法20.73±0.14，RNA抽提法21.06±0.21；t=1.749, P>0.05)结果差异均无统计学意义。2种方法检测U6（r=0.860 5，P<0.01）、miR-24-1-5p（r=0.728 9，P<0.05）和miR-4634 （r=0.748 5，P<0.01）结果具有较好的相关性。混合引物和单个引物逆转录后PCR的Cq值之间无明显差异。结论建立的血浆直接检测法只需对血浆标本进行简单的预处理，并可使用混合引物进行逆转录定量PCR，具有操作简便、检测成本低等优点，值得进一步推广应用。 （中华检验医学杂志，2014,37：119-122）