论文部分内容阅读
目的观察在他莫昔芬诱导下,心肌特异性Hdac3基因缺失对小鼠心脏病理结构及其心脏功能的影响。方法利用Cre/Loxp基因重组系统,将Hdac3loxp/loxp小鼠与Myh6-cre ERT小鼠进行杂交,获得带有心肌特异性启动子的Myh6-cre ERT/Hdac3loxp/loxp小鼠,并按随机数字表法将28只8周龄雄性Myh6-cre ERT/Hdac3loxp/loxp小鼠分为对照组、模型组。模型组小鼠腹腔注射0.2 mL他莫昔芬（40 mg/mL）,每天1次,连续5 d,从而诱导性敲除心肌特异性Hdac3基因;对照组小鼠注射0.2 mL的玉米油。在模型建立后第1、4周,采用经胸二维超声心动图检测两组小鼠舒张末期室间隔厚度（diastolic interventricular septum,IVSd）、舒张末期左室后壁厚度（diastolic left ventricular posterior wall,LVPWd）、射血分数（ejection fraction,EF）、左室短轴缩短率（fractional shortening,FS）。随后获取并观察小鼠心脏组织,采用HE染色、Masson三色染色、天狼星红染色、WGA免疫荧光染色检测小鼠心脏病理改变。采用TUNEL检测心肌细胞凋亡水平,Western blot检测DNA损伤相关指标。结果 Hdac3基因缺失后,与对照组相比,模型组小鼠IVSd与LVPWd明显增高（P<0.05）,EF与FS明显降低（P<0.05）。病理学观察结果显示,与对照组相比,模型组小鼠于Hdac3基因敲除后第1周,心肌细胞排列紊乱,横断面显示心肌细胞肥大,间质纤维化增多,伴有少量的炎症细胞浸润;第4周可见弥漫的心肌纤维化与肥大不规则的心肌细胞。TUNEL免疫荧光染色显示模型组凋亡细胞较对照组显著增多（P<0.05）;Western blot检测结果显示,模型组γH2AX蛋白表达量显著高于对照组（P<0.05）。结论小鼠心肌特异性Hdac3基因的缺失能够引起DNA损伤并诱导心肌细胞凋亡,导致心肌细胞发生病理性结构改变及心脏功能降低,最终引起心室重构。