siRNA干扰Caco-2细胞鞘磷脂合酶2(SMS2)基因对药物转运体的影响

来源 :复旦学报(医学版) | 被引量 : 0次 | 上传用户:ewen2005
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目的研究鞘磷脂合酶2(sphingomyelin synthase 2,SMS2)缺损对人结肠癌细胞(colon cancer cell,Caco-2)中药物转运体P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的表达与功能的影响。方法 SMS2特异性siRNA转染至Caco-2细胞。采用RT-PCR和real-time PCR检测SMS2-特异性siRNA的干扰效率;采用Western blot法检测siRNA转染后P-gp和MRP2蛋白表达的变化;采用胞内蓄积试验,通过HPLC检测P-gp及MRP2专一性底物罗丹明123及普伐他汀的蓄积含量,分析下调SMS2水平对Caco-2细胞中P-gp及MRP2功能的影响。结果应用siRNA下调SMS2水平后,P-gp和MRP2的蛋白质水平均显著下调;胞内蓄积实验结果显示罗丹明123及普伐他汀的蓄积量明显增加,说明P-gp和MRP2的外排功能减弱。结论SMS2基因表达下调对Caco-2细胞中P-gp和MRP2的表达以及功能均有显著影响。
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