【摘 要】
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目的:应用同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的腺病毒载体pAdPTEN cDNA,产生重组腺病毒AdPTEN。方法:将PTEN cDNA自载体pcDNA3-PTEN cDNA中切出,亚克隆至穿梭质粒pShu
【机 构】
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长海医院妇产科,长海医院妇产科,第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,长海医院妇产科,第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室,第
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目的:应用同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的腺病毒载体pAdPTEN cDNA,产生重组腺病毒AdPTEN。方法:将PTEN cDNA自载体pcDNA3-PTEN cDNA中切出,亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,然后与腺病毒质粒pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组,产生重组PTEN cDNA的腺病毒载体pAdPTEN cDNA,通过脂质体介导将pAdPTEN cDNA转染至HEK293细胞,产生有感染能力的腺病毒AdPTEN,并测定其滴度。结果:产生具有感染能力的重组腺病毒AdPTEN,滴度约为5×109pfu／ml。结论:成功构建出含有PTEN cDNA的具有感染能力的腺病毒,并可获得较高的病毒滴度,为进一步研究PTEN基因的功能和相关肿瘤的基因治疗提供有效的基因转移载体。
OBJECTIVE: To construct the adenovirus vector pAdPTEN cDNA containing the PTEN cDNA of wild type tumor suppressor gene by homologous recombination to generate recombinant adenovirus AdPTEN. METHODS: PTEN cDNA was excised from pcDNA3-PTEN cDNA, subcloned into shuttle plasmid pShuttle-CMV, then homologously recombined with adenoviral plasmid pAdeasy-1 in E. coli BJ5183 to generate recombinant adenovirus vector of PTEN cDNA pAdPTEN cDNA. The pAdPTEN cDNA was transfected into HEK293 cells by lipofectamine to generate infectious adenovirus AdPTEN, and its titer was determined. Results: The recombinant adenovirus AdPTEN was produced with a titer of about 5 × 109 pfu / ml. Conclusion: The adenovirus containing PTEN cDNA was successfully constructed and the titer of virus was high, which provided an effective gene transfer vector for further studying the function of PTEN gene and gene therapy of related tumors.
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