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构建针对多效蛋白(pleiotrophin，PTN)基因的小干涉RNA(siRNA)慢病毒表达载体并观察其对人小细胞肺癌H446细胞株PTN表达抑制及对细胞生长和凋亡的影响。
方法设计4对针对PTN基因的小发夹RNA(shRNA)序列，与Plvthm载体连接，构建慢病毒表达载体LV(lentiviral)-shPTN，连接产物转化到DH5α感受态细胞，阳性克隆测序鉴定。再用LV-shPTN与pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G三种质粒共转染293T细胞，小量包装与纯化产生慢病毒颗粒。感染H446细胞后，用荧光定量PCR及Western blot法检测PTN的表达。将包含对PTN基因干扰效率最高的序列慢病毒载体进行大量包装、纯化及病毒滴度测定，将包装好的病毒感染H446细胞。实验分为正常未干扰细胞组、阴性对照组、PTN抑制组、化疗组及PTN抑制加化疗组，四甲基偶氮唑盐比色法观察细胞生长，流式细胞仪分析细胞凋亡。
结果测序结果与构建慢病毒载体的预期结果一致，对PTN mRNA的最高抑制效率为72%，对PTN蛋白的最高抑制效率为59%。大量包装与纯化后病毒滴度为1×108 TU/ml。PTN基因抑制组H446细胞活力明显低于正常未干扰细胞组和阴性对照组，基因抑制联合化疗组较单纯基因抑制组及化疗组细胞活力下降，凋亡率增高，并具有浓度依赖性。
结论构建PTN RNA干涉载体，转染后可有效降低H446细胞PTN的转录和表达，抑制H446细胞的生长并促进其凋亡，有望成为小细胞肺癌基因治疗的可选择的方法之一。