【摘 要】
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目的 重组腺病毒气管途径反复转染大鼠肺组织人类内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因的转导效果.方法 雄性Wistar大鼠60只,3～4月龄,体重220 ～ 280 g,采用随机数字表法,将其随机分为2组:对照组(C组,n=10)和重组eNOS基因转染组(T组,n=50).麻醉下,气管插管,行机械通气,T组气管内注射滴度为5×109 PFU/ml的携带人类eNOS基因的重组腺病毒载体质粒DNA 50μ
【机 构】
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110016沈阳军区总医院麻醉科,110016沈阳军区总医院麻醉科,110016沈阳军区总医院麻醉科,110016沈阳军区总医院麻醉科,中国医科大学第一附属医院麻醉科
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目的 重组腺病毒气管途径反复转染大鼠肺组织人类内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因的转导效果.方法 雄性Wistar大鼠60只,3～4月龄,体重220 ～ 280 g,采用随机数字表法,将其随机分为2组:对照组(C组,n=10)和重组eNOS基因转染组(T组,n=50).麻醉下,气管插管,行机械通气,T组气管内注射滴度为5×109 PFU/ml的携带人类eNOS基因的重组腺病毒载体质粒DNA 50μl,C组注射等容量病毒保存液,每隔5 min重复经气管内注射一次,共注射12次.T组分别于转染后2、5、7、14、21 d时取10只大鼠,采集肺动脉血样,采用硝酸还原酶法测定血清NO浓度,分别采用Western blot法及荧光定量PCR技术检测肺组织eNOS其及RNA表达,采用免疫组化法测定气管、支气管、肺、肝、脾、肾组织eNOS表达.结果 与C组比较,T组各时点肺动脉血清NO浓度、肺组织eNOS及其RNA表达升高(P＜0.05)；转染后7、14和21 d时明显高于转染后2 d(P＜ 0.05).T组气管、支气管上皮细胞、肺泡囊内细胞和肺内小血管的内皮细胞均有eNOS表达,而C组未见eNOS表达.转染后7d时肝、脾、肾组织未见eNOS表达.结论 重组腺病毒气管途径反复转染大鼠肺组织人类eNOS基因后,可实现外源基因在肺内表达,且具有正常的酶活性,无远隔器官表达。
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