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胸腹水脱落细胞学检查,具有结果快速,诊断准确等特点。但是,恶性肿瘤的血性胸腹水标本,由于有大量的血细胞,影响制片质量和诊断结果。现在工作中对血性胸腹水的涂片制作方法进行了改进,介绍如下。
一般方法
用吸管吸取血性胸腹水底部的沉淀物入离心管,离心后直接涂片,染色,观察结果。
结果评价,玻片上血细胞满视野,间皮细胞很少。
改进方法
低渗氯化钾液+甲醇:冰醋酸液破坏法,取4.8g氯化钾溶于1000ml蒸馏水中,制成低渗氯化钾液(0.66mol/L)。①吸取血性胸腹水16ml入离心管内,1500r/分,离心7分钟,弃上清液;②加入氯化钾溶液16ml,用吸管将沉淀物吹打混匀,室温下静置20分钟;③甲醇:冰醋酸(3∶ 1)混合液滴加10滴,混匀后1500r/分,离心7分钟,弃上清液;④离心管加入甲醇:冰醋酸混合液16ml,将沉淀物吹打混匀后,室温下静置15分钟,弃上清液(2次);⑤将沉淀物均匀涂抹于玻片上,固定染色,观察结果。
结果评价,玻片上很少见到红细胞、间质细胞、肿瘤细胞、淋巴细胞较完整,细胞轮廓清楚,胞膜完整,胞质及胞核染色清晰。
讨 论
血性胸腹水涂片制作的关键是如何既破坏红细胞,又保持其他细胞的完整性。一般的制作方法由于沉淀物中主要为红细胞,从而影响对肿瘤细胞的观察。低渗氯化钾液+甲醇∶ 冰醋酸混合液的方法,效果较好。该方法除能完全破坏红细胞外,还能较好的保持其他细胞的完整性,有利于提高阳性检出率。低渗氯化钾液+甲醇:冰醋酸法每一步均有不同的原理。第1步加入低渗氯化钾液后静置,液体逐渐进入细胞内,离心时滴加甲醇:冰醋酸液、甲醇能起到固定的作用,而冰醋酸能迅速凝固蛋白(如果血性胸腹水非常黏稠,不需加甲醇∶ 冰醋酸液,可直接离心再加入氯化钾低渗液,静置20分钟,离心时再加入甲醇:冰醋酸液,否则会全部成黏稠状)。第2步加入甲醇:冰醋酸液,主要起到固定作用。经上述处理后的血性胸腹水涂片,肿瘤细胞、间质细胞、淋巴细胞较完整,红细胞几乎完全消失。
一般方法
用吸管吸取血性胸腹水底部的沉淀物入离心管,离心后直接涂片,染色,观察结果。
结果评价,玻片上血细胞满视野,间皮细胞很少。
改进方法
低渗氯化钾液+甲醇:冰醋酸液破坏法,取4.8g氯化钾溶于1000ml蒸馏水中,制成低渗氯化钾液(0.66mol/L)。①吸取血性胸腹水16ml入离心管内,1500r/分,离心7分钟,弃上清液;②加入氯化钾溶液16ml,用吸管将沉淀物吹打混匀,室温下静置20分钟;③甲醇:冰醋酸(3∶ 1)混合液滴加10滴,混匀后1500r/分,离心7分钟,弃上清液;④离心管加入甲醇:冰醋酸混合液16ml,将沉淀物吹打混匀后,室温下静置15分钟,弃上清液(2次);⑤将沉淀物均匀涂抹于玻片上,固定染色,观察结果。
结果评价,玻片上很少见到红细胞、间质细胞、肿瘤细胞、淋巴细胞较完整,细胞轮廓清楚,胞膜完整,胞质及胞核染色清晰。
讨 论
血性胸腹水涂片制作的关键是如何既破坏红细胞,又保持其他细胞的完整性。一般的制作方法由于沉淀物中主要为红细胞,从而影响对肿瘤细胞的观察。低渗氯化钾液+甲醇∶ 冰醋酸混合液的方法,效果较好。该方法除能完全破坏红细胞外,还能较好的保持其他细胞的完整性,有利于提高阳性检出率。低渗氯化钾液+甲醇:冰醋酸法每一步均有不同的原理。第1步加入低渗氯化钾液后静置,液体逐渐进入细胞内,离心时滴加甲醇:冰醋酸液、甲醇能起到固定的作用,而冰醋酸能迅速凝固蛋白(如果血性胸腹水非常黏稠,不需加甲醇∶ 冰醋酸液,可直接离心再加入氯化钾低渗液,静置20分钟,离心时再加入甲醇:冰醋酸液,否则会全部成黏稠状)。第2步加入甲醇:冰醋酸液,主要起到固定作用。经上述处理后的血性胸腹水涂片,肿瘤细胞、间质细胞、淋巴细胞较完整,红细胞几乎完全消失。