利用分子生物学方法检测肛门直肠畸形(anorectal malformations, ARM)大鼠胚胎发育中Sfrp5/Dkk4基因的表达。
方法对Wistar孕鼠进行乙烯硫脲(ethylenethiourea, ETU)致畸，制作ARM动物模型；分别在孕15 d(E15)、17 d(E17)、19 d(E19)和21 d(E21)，于ETU-无畸形对照组(NE组)、ETU-ARM畸形组(AE组)和生理盐水对照组(NS组)中各选取6只胎鼠末端直肠组织，采用蛋白印迹(Western blot)和实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测Sfrp5/Dkk4的表达，并对其表达进行定量与比较分析。
结果Western blot结果显示在E15、E17、E19和E21时，Sfrp5在NE组蛋白表达量分别为63.55±0.35、24.51±0.41、13.28±0.09和49.67±0.12；在AE组分别为21.43±0.18、59.57±0.44、61.23±0.47和32.73±0.51；在NS组分别为52.17±1.08、23.66±0.87、16.21±1.33和50.01±2.03。Dkk4在NE组蛋白表达量分别为20.07±0.09、47.15±0.15、39.88±0.37和13.75±0.47；在AE组分别为54.27±0.61、19.43±0.25、21.09±0.17和57.53±0.49；在NS组分别为23.11±0.15、45.89±0.67、41.44±0.37和17.57±1.99。提示NE组、NS组Sfrp5/Dkk4与AE组E17和E19蛋白表达量比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；而NE组与NS组在4个时间点比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。qRT-PCR结果显示在E17和E19时，Sfrp5在AE组中mRNA高表达，其表达量分别是NE组的1.63倍和1.77倍(P＝0.049、0.022)、NS组的2.68倍和3.29倍(P＝0.041、0.034)；Dkk4在AE组中mRNA高表达，其表达量是NE组的1.75倍和1.87倍(P＝0.045、0.024)、NS组的2.04倍和1.36倍(P＝0.004、0.028)。
结论Sfrp5/Dkk4蛋白与mRNA在胚胎发育过程E17和E19中出现异常表达，可能是导致ARM发病的因素。