【摘 要】
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目的观察探讨人脐带间充质干细胞源性微囊泡（hUMSC-MV）对高糖诱导下大鼠视网膜神经节细胞（RGC）损伤的保护作用及机制。方法体外培养Sprague-Dawley大鼠RGC；超速离心法分离提取并鉴定hUMSC-MV；观察hUMSC-MV与RGC的内化作用。实验分为正常RGC对照组（A组）、高糖对照组（B组）、正常共培养组（C组）、高糖共培养组（D组）进行。A组细胞正常培养，B组细胞为33 mmo
【机 构】
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300020 天津医科大学眼科临床学院 天津市眼科医院 天津市眼科学与视觉科学重点实验室天津市眼科研究所,300020 天津医科大学眼科临床学院 天津市眼科医院 天津市眼科学与视觉科学重点实验室天津市
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目的观察探讨人脐带间充质干细胞源性微囊泡（hUMSC-MV）对高糖诱导下大鼠视网膜神经节细胞（RGC）损伤的保护作用及机制。
方法体外培养Sprague-Dawley大鼠RGC；超速离心法分离提取并鉴定hUMSC-MV；观察hUMSC-MV与RGC的内化作用。实验分为正常RGC对照组（A组）、高糖对照组（B组）、正常共培养组（C组）、高糖共培养组（D组）进行。A组细胞正常培养，B组细胞为33 mmol/L葡萄糖培养，C组细胞为hUMSC-MV培养，D组细胞为33 mmol/L葡萄糖、hUMSC-MV共培养。采用细胞计数CCK-8试剂盒测定各组RGC活性；采用膜联蛋白（Annexin）V／碘化丙啶（PI）测量各组RGC凋亡率。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组RGC内B-细胞淋巴瘤／白血病-2 （Bcl-2）、Bax、半胱天冬蛋白酶（Caspase）-3 mRNA和蛋白的相对表达量。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。
结果超速离心法提取的hUMSC-MV形态为单个或成簇的圆形膜性囊泡样结构，直径约为100~ 1000 nm. hUMSC-MV表面高表达CD44、CD29、CD73、CD105，阴性表达CD49f、第二型人类白血球抗原、CD34、CD45。大鼠RGC与hUMSCs-MV良好内化。CCK-8及Annexin V/PI双染法检测结果显示，B组细胞活性低于A、C、D组（F=107.92，P=0.000），B组细胞凋亡率高于A、C、D组，差异均有统计学意义（F=382.11 ，P=0.000）。RT-PCR及Western blot检测结果显示，B、D组RGC内Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达（F=219.79、339.198、1 071.21，P=0.000、0.000、0.000）以及Bcl-2、Bax、裂解的Caspase-3、Caspase-3蛋白表达（F=544.28、295.79、533.18、224.75 ，P=0.000、0.000、0.000、0.000）均高于A、C组，差异有统计学意义。进一步两两比较，D组RGC内Bcl-2 mRNA和蛋白表达高于B组，差异有统计学意义（P<0.05）；B组Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达以及裂解的Caspase-3蛋白表达均高于D组，差异有统计学意义（P<0.05 ）。
结论hUMSC-MV可通过降低高糖诱导下大鼠RGC内Bax、Caspase-3的表达及活化，增加Bcl-2表达发挥对RGC损伤的保护作用。
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