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Résumé: Objectif Lobjectif de ce travail est detablir une méthode danalyse du polymorphisme de la conformation monochaine (PCMC), capable de détecter la mutation ponctuelle du gène hMLH1 dans le cancer colique en utilisant l l ctrophor se capillaire associée a la fluorescence laser-induite (FLI-EC). Méthodes Les exons 12 du gène hMLH1 du sang périphérique de 42 patients de cancer colo-rectal sporadique et 20 sujets sains témoins sont amplifiés par la PCR. Le PCMC des produits du PCR est analysé par FLI-EC. Les échantillons anormaux ont été confirmés par séquen age EC. Les effets de la concentration du milieu (LPA), de la température de séparationet du voltage de séparation sur le comportement de EC ont été aussi etudiés. Résultats Lanalyse de PCMC par la methode FLI-EC a retrouvé une mutation hétérozygote chez 4 des 42 patients. La mutation ponctuelle de T1151A a été objectivée par la séquen age EC de ces échantillons, aucune mutation na été retrouvée chez les 20 sujets sains témoins. La séparation des pics dADN monochainaux a été facilitée par une légère augmentation de la concentration de LPA (4%-6%), une légère baisse de la température de séparation (20℃) et une légère élévation du voltage de séparation (9kV). Conclusion Une concentration adéquate de LPA, une température de séparation appropriée et un voltage de séparation bien approprié améliorent considérablement l’efficacité du FLI-EC. L’application de cette méthode pour détecter la mutation ponctuelle du gène hMLH1 est d’une rapidité, d’une efficacité, et d’uneéreproductivit consid rables. Cette méthode de réalisation facile reste très prometteur pour le dépistage rapide et massive des mutations génétiques.
Résumé: Objectif Lobjectif de ce travail est detablir une méthode danalyse du polymorphisme de la conformation monochaine (PCMC), capable de détecter la mutation ponctuelle du gène hMLH1 dans le cancer colique en utilisant l l ctrophor se capillaire associée a la fluorescence laser-induite (FLI-EC). Méthodes Les exons 12 du gène hMLH1 du sang périphérique de 42 patients de cancer colo-rectal sporadique et 20 sujets sains témoins sont amplifiés par la PCR. Le PCMC des produits du PCR est analysé Par FLI-EC. Les échantillons anormaux ont été confirmés par séquen age EC. Les effets de la concentration du milieu (LPA), de la température de séparationet du voltage de séparation sur le comportement de EC ont été aussi etudiés. Résultats Lanalyse De PCMC par la methode FLI-EC a retrouvé une mutation hetérozygote chez 4 des 42 patients. La mutation ponctuelle de T1151A a été objectivée par la séquen age EC de ces échantillons, aucune mutation n a été retrouvée chez les 20 sujets sains témoins. La séparation des pics dADN monochainaux a été facilitée par une légère augmentation de la concentration de LPA (4%-6%), une légère baisse de la température de séparation (20°C) Et une légère elevation du voltage de séparation (9kV). Conclusion Une concentration adéquate de LPA, une température de séparation appropriée et un voltage de séparation bien approprié améliorent considérablement l’efficacité du FLI-EC. L’application de cette méthode pour détecter la Mutation ponctuelle du gène hMLH1 est d’une rapidité, d’une efficacité, et d’uneéreproductivit consid rables. Cette méthode de réalisation facile reste très prometteur pour le dépistage rapide et massive des mutations génétiques.