【摘 要】
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目的 探讨紧密连接蛋白claudin-6过表达对乳腺癌细胞MCF-7生物学行为的影响.方法 用脂质体法将含有claudin-6的真核表达载体转染乳腺癌细胞系MCF-7后,采用RT-PCR、Western印迹和细胞免疫荧光的方法进行稳定克隆的筛选和鉴定;采用MTT法和克隆形成实验检测细胞生长情况;采用划痕法和Boyden小室体外侵袭实验检测细胞迁移和侵袭性.结果 建立了稳定表达claudin-6基因
【机 构】
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130021,长春,吉林大学病理生物学教育部重点实验室,130021,长春,吉林大学病理生物学教育部重点实验室,130021,长春,吉林大学病理生物学教育部重点实验室,130021,长春,吉林大学病理
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目的 探讨紧密连接蛋白claudin-6过表达对乳腺癌细胞MCF-7生物学行为的影响.方法 用脂质体法将含有claudin-6的真核表达载体转染乳腺癌细胞系MCF-7后,采用RT-PCR、Western印迹和细胞免疫荧光的方法进行稳定克隆的筛选和鉴定;采用MTT法和克隆形成实验检测细胞生长情况;采用划痕法和Boyden小室体外侵袭实验检测细胞迁移和侵袭性.结果 建立了稳定表达claudin-6基因的4株单克隆(C1,C2,C3,C4);细胞免疫荧光结果显示,claudin-6的表达主要定位于细胞膜;与对照组和空载体组相比,稳定表达claudin-6的MCF-7细胞生长缓慢,转染6 h时吸光度A值CI为1.62,C2为1.25,C3为1.30,C4为1.58与对照组A值1.78及空载组1.82比较明显降低.其克隆形成率CI为0.25,C2为0.17,C3为0.26,C4为0.21明显低于对照组(0.53)和空载组(0.45);细胞的迁移性、侵袭性被抑制.结论 claudin-6的过表达能够抑制MCF-7细胞的生长和转移等恶性表型,说明紧密连接蛋白claudin-6作为乳腺癌表型抑制基因在乳腺癌发生及转移中起负性调控作用。
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