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摘要：
敏感性肌肤作为令人困扰的皮肤问题已经成为影响生活质量的关键因素之一。敏感肌肤通常伴随末梢神经感受器的过度反应，尤其是由于TRPV1过度活跃所导致的灼烧、刺痛的等不良感觉。之前的研究显示，末梢神经感受器的TRPV1受体对于辣椒素的敏感性与自述的敏感肌肤现象具有明确的相关性。通过筛选我们确认4-叔丁基环己烷作为特定的TRPV1拮抗剂，并经人体测试证明可有效阻断由辣椒素引起的灼烧感或刺痛感，从而有效舒缓肌肤不适感。
体外测试In vitro：HEK293细胞能够稳定地表达重组人类TRPV1受体，可用来筛选潜在的TRPV1拮抗剂。由于辣椒素能激活TRPV1，诱导FLEX系统中钙离子浓度的变化(钙离子的连续变化)，并对钙离子浓度的变化进行测定。体内测试In vivo：30位志愿者对辣椒素的敏感性进行研究测试，使用两种不同的软膏涂于面部，一种含有辣椒素，另一种含有辣椒素和0.4％的4-叔丁基环己烷。在随后的3分钟评价其刺痛感和灼烧感，按以下几个等级评分：0(没有感觉)——4(强烈的感觉)；使用Wilcoxon平行对照方法进行统计分析。
4-叔丁基环己烷可以抑制由于辣椒素诱导的通过TRPV1的钙离子流量，在人体测试中，其IC50为34μM。刺痛的感觉评分显著降低，由1.6降至0.6(p＜0.001)，灼烧感的感觉评分也明显降低，从2.8降至0.8(p＜0.0001)。基于这些结果，我们确认4-叔丁基环己烷是有效的TRPV1拮抗剂，无论体外实验还是活体实验都得到了很好的证明。此外，该活性物能有效舒缓敏感肌肤，从而抑制刺痛感和灼烧感。
关键词：TRPVI受体 TRPV1拮抗剂 辣椒素诱导的抑制 敏感肌肤
介绍
敏感肌肤作为常见的困扰肌肤状态普遍存在，且很大程度上影响了生活的质量。超过50％的消费者自述为敏感性肌肤。据报道，敏感性肌肤在消费者所占比例，在欧洲和美国人群中占50％，在日本和中国人群中占36％。
敏感性肌肤的临床表现通常伴随着灼烧、刺痛和瘙痒的面部不适感。由于外界的因素引起了肌肤的敏感，如气流或快速变化的温度，抑或使用了化学或天然的混合物。敏感肌肤是一种神经现象，与超敏性或特异性皮炎无关。试验结果提示，敏感肌肤与表皮敏感神经的生理机制有关，临床测试研究中，敏感肌肤的受试者使用了辣椒素这一对皮肤具有高反应性的原料。
辣椒素是瞬时感受器电位离子通道香兰素亚家族(TRPV1，辣椒素受体，VR1)的天然拮抗剂。TRPV1用于表达中枢和末梢神经。不同类型的刺激物对受体进行激活，如低pH值(＜5.9)，损害性高温(＞42℃)，大麻／内源性大麻素，白三烯B4和外源性辣椒素。
因此，如：使用辣椒素后，TRPV1被激活，引起灼痛感或灼烧感。此外，TRPV1受体会被缓激肽和前列腺素、以及神经生长因子所激活，并降低响应阈值，使疼痛及痒感更易发生。由于TRPV1的感觉功能(灼烧感，瘙痒症)，可以推测TRPV1与敏感肌肤相关。
TRPV1在很多非神经细胞上表达，其中包括角化细胞，分化的皮脂细胞，毛囊细胞，汗腺导管，肥大细胞，3T3-L1-前脂肪细胞和成纤维细胞，辣椒素或高温激活在角化细胞中的TRPV1，促进炎症因子前列腺素PGE2和白介素IL-8的释放，并诱导释放MMP-1。此外，辣椒素可作为毛发生长的抑制剂。最近，有研究报道在温度34℃或42℃时，屏障修复的时间会显著延缓。辣椒素也会延迟屏障修复，而TRPV1拮抗剂阻断了这种延迟。因此提示TRPV1也参与了表皮屏障的动态平衡。
由于TRPV1广泛分布在皮肤细胞中，且与刺痛感、皮肤炎症、皮肤老化、甚至头发的生长调节等功能具有相关性，使得TRPV1在美容行业成为被高度关注的焦点。因此，我们专门开发了TRPV1拮抗剂引入化妆品领域。
实验：原料和方法
In vitro体外测试：利用可以稳定表达人体TRPV1的HEK293细胞系，进行筛选测试。测试有效范围在0.5-50μM的潜在的拮抗剂。被测试的化合物不但平行加入30nM的辣椒素，且在加入辣椒素之前10分钟加入。以药理TRPV1拮抗剂钌红(1μM)作为阳性对照。通过对TRPV1活化诱导的钙流量使用钙敏感荧光染料fluo-4(494/516nm(ex/em))进行测定。
结果和讨论
通过对17,000种各种不同的化合物进行筛选出170个候选化合物并进行验证，筛选出5种化合物进行进一步的研究，其中4种为天然化合物的合成衍生物，一种为芳香化合物4-叔丁基环己醇。
临床测试
在人体实验中，我们分别选出20和30名的受试者以验证对辣椒素的敏感性。
使用两种不同的乳剂涂于鼻唇沟，其中一种含有辣椒素，另一种含有辣椒素和1％的4-叔丁基环己烷，临床研究1％(见图2)或0.4％的4-叔丁基环己烷，临床研究2(图3)。
3分钟后评价刺痛感和灼烧感，按O(没有感知)4分(强烈的感觉)进行打分；使用Wilcoxon配对测试方法进行统计分析。
结论
基于上述结果，可以确认4-叔丁基环己烷是有效的TRPV1拮抗剂，并经体外和人体试验证实。根据不同的剂量，当使用1％4-叔丁基环己烷时，与空白对照相比，可有效降低刺痛感和灼烧感4.5倍；当使用0.4％4-叔丁基环己烷时，与空白对照相比，可有效降低刺痛感和灼烧感2倍之多(人体测试in vivo)，从而表明由辣椒索引起的刺痛感和灼烧感被4-叔丁基环己烷有效降低到了感觉阈值水平之下。
因此，4-叔丁基环己烷属于用于敏感肌肤的划时代的活性成分。它对肌肤的调节作用有助于提高肌肤的耐受阈值。同时，它可作为“敏感调节器”，在细胞膜中降低钙离子流量，使肌肤恢复正常健康的状态。
编辑 林 婕
敏感性肌肤作为令人困扰的皮肤问题已经成为影响生活质量的关键因素之一。敏感肌肤通常伴随末梢神经感受器的过度反应，尤其是由于TRPV1过度活跃所导致的灼烧、刺痛的等不良感觉。之前的研究显示，末梢神经感受器的TRPV1受体对于辣椒素的敏感性与自述的敏感肌肤现象具有明确的相关性。通过筛选我们确认4-叔丁基环己烷作为特定的TRPV1拮抗剂，并经人体测试证明可有效阻断由辣椒素引起的灼烧感或刺痛感，从而有效舒缓肌肤不适感。
体外测试In vitro：HEK293细胞能够稳定地表达重组人类TRPV1受体，可用来筛选潜在的TRPV1拮抗剂。由于辣椒素能激活TRPV1，诱导FLEX系统中钙离子浓度的变化(钙离子的连续变化)，并对钙离子浓度的变化进行测定。体内测试In vivo：30位志愿者对辣椒素的敏感性进行研究测试，使用两种不同的软膏涂于面部，一种含有辣椒素，另一种含有辣椒素和0.4％的4-叔丁基环己烷。在随后的3分钟评价其刺痛感和灼烧感，按以下几个等级评分：0(没有感觉)——4(强烈的感觉)；使用Wilcoxon平行对照方法进行统计分析。
4-叔丁基环己烷可以抑制由于辣椒素诱导的通过TRPV1的钙离子流量，在人体测试中，其IC50为34μM。刺痛的感觉评分显著降低，由1.6降至0.6(p＜0.001)，灼烧感的感觉评分也明显降低，从2.8降至0.8(p＜0.0001)。基于这些结果，我们确认4-叔丁基环己烷是有效的TRPV1拮抗剂，无论体外实验还是活体实验都得到了很好的证明。此外，该活性物能有效舒缓敏感肌肤，从而抑制刺痛感和灼烧感。
关键词：TRPVI受体 TRPV1拮抗剂 辣椒素诱导的抑制 敏感肌肤
介绍
敏感肌肤作为常见的困扰肌肤状态普遍存在，且很大程度上影响了生活的质量。超过50％的消费者自述为敏感性肌肤。据报道，敏感性肌肤在消费者所占比例，在欧洲和美国人群中占50％，在日本和中国人群中占36％。
敏感性肌肤的临床表现通常伴随着灼烧、刺痛和瘙痒的面部不适感。由于外界的因素引起了肌肤的敏感，如气流或快速变化的温度，抑或使用了化学或天然的混合物。敏感肌肤是一种神经现象，与超敏性或特异性皮炎无关。试验结果提示，敏感肌肤与表皮敏感神经的生理机制有关，临床测试研究中，敏感肌肤的受试者使用了辣椒素这一对皮肤具有高反应性的原料。
辣椒素是瞬时感受器电位离子通道香兰素亚家族(TRPV1，辣椒素受体，VR1)的天然拮抗剂。TRPV1用于表达中枢和末梢神经。不同类型的刺激物对受体进行激活，如低pH值(＜5.9)，损害性高温(＞42℃)，大麻／内源性大麻素，白三烯B4和外源性辣椒素。
因此，如：使用辣椒素后，TRPV1被激活，引起灼痛感或灼烧感。此外，TRPV1受体会被缓激肽和前列腺素、以及神经生长因子所激活，并降低响应阈值，使疼痛及痒感更易发生。由于TRPV1的感觉功能(灼烧感，瘙痒症)，可以推测TRPV1与敏感肌肤相关。
TRPV1在很多非神经细胞上表达，其中包括角化细胞，分化的皮脂细胞，毛囊细胞，汗腺导管，肥大细胞，3T3-L1-前脂肪细胞和成纤维细胞，辣椒素或高温激活在角化细胞中的TRPV1，促进炎症因子前列腺素PGE2和白介素IL-8的释放，并诱导释放MMP-1。此外，辣椒素可作为毛发生长的抑制剂。最近，有研究报道在温度34℃或42℃时，屏障修复的时间会显著延缓。辣椒素也会延迟屏障修复，而TRPV1拮抗剂阻断了这种延迟。因此提示TRPV1也参与了表皮屏障的动态平衡。
由于TRPV1广泛分布在皮肤细胞中，且与刺痛感、皮肤炎症、皮肤老化、甚至头发的生长调节等功能具有相关性，使得TRPV1在美容行业成为被高度关注的焦点。因此，我们专门开发了TRPV1拮抗剂引入化妆品领域。
实验：原料和方法
In vitro体外测试：利用可以稳定表达人体TRPV1的HEK293细胞系，进行筛选测试。测试有效范围在0.5-50μM的潜在的拮抗剂。被测试的化合物不但平行加入30nM的辣椒素，且在加入辣椒素之前10分钟加入。以药理TRPV1拮抗剂钌红(1μM)作为阳性对照。通过对TRPV1活化诱导的钙流量使用钙敏感荧光染料fluo-4(494/516nm(ex/em))进行测定。
结果和讨论
通过对17,000种各种不同的化合物进行筛选出170个候选化合物并进行验证，筛选出5种化合物进行进一步的研究，其中4种为天然化合物的合成衍生物，一种为芳香化合物4-叔丁基环己醇。
临床测试
在人体实验中，我们分别选出20和30名的受试者以验证对辣椒素的敏感性。
使用两种不同的乳剂涂于鼻唇沟，其中一种含有辣椒素，另一种含有辣椒素和1％的4-叔丁基环己烷，临床研究1％(见图2)或0.4％的4-叔丁基环己烷，临床研究2(图3)。
3分钟后评价刺痛感和灼烧感，按O(没有感知)4分(强烈的感觉)进行打分；使用Wilcoxon配对测试方法进行统计分析。
结论
基于上述结果，可以确认4-叔丁基环己烷是有效的TRPV1拮抗剂，并经体外和人体试验证实。根据不同的剂量，当使用1％4-叔丁基环己烷时，与空白对照相比，可有效降低刺痛感和灼烧感4.5倍；当使用0.4％4-叔丁基环己烷时，与空白对照相比，可有效降低刺痛感和灼烧感2倍之多(人体测试in vivo)，从而表明由辣椒索引起的刺痛感和灼烧感被4-叔丁基环己烷有效降低到了感觉阈值水平之下。
因此，4-叔丁基环己烷属于用于敏感肌肤的划时代的活性成分。它对肌肤的调节作用有助于提高肌肤的耐受阈值。同时，它可作为“敏感调节器”，在细胞膜中降低钙离子流量，使肌肤恢复正常健康的状态。
编辑 林 婕