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目的：对无饲养层条件下原代分离培养小鼠胚胎干细胞（ESC）的可行性进行研究。方法：利用微滴培养技术，将小鼠胚泡分别置于无饲养层条件及人胚胎成纤维细胞（HEF）饲养层上进行培养。观察胚泡的发育行为，并对两种不同条件下ESC的克隆率进行研究。结果：在无饲养层及HEF饲养层条件下小鼠囊胚均可以正常发育，并可以原代培养出ESC克隆，但无饲养层体系的胚泡48h贴壁率（71．93％）及原代ESC克隆率（5．26％）低于HEF饲养层体系（88．71％，19．35％）（P〈0．05）。结论：无饲养层条件下可以成功原代分离