小鼠T-bet基因重组腺病毒载体的构建及制备

来源 :免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：jackfbi

【摘要】

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目的构建小鼠T-bet基因重组腺病毒。方法采用RT-PCR方法从小鼠脾脏活化的T淋巴细胞中扩增的cDNA序列，并将其克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中，形成转移质粒，酶切线性化后，与超螺旋腺

【作者】

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陈吉泉修清玉刘涛何皓頔颜泽敏

【机构】

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第二军医大学长征医院呼吸内科

【出处】

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免疫学杂志

【发表日期】

：

2007年1期

【关键词】

：

T-BET AdEasy系统基因治疗腺病毒载体 T-bet AdEasy system Gene therapy Adenoviral vector

【基金项目】

：

国家自然科学基金资助项目（30200116）

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目的构建小鼠T-bet基因重组腺病毒。方法采用RT-PCR方法从小鼠脾脏活化的T淋巴细胞中扩增的cDNA序列，并将其克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中，形成转移质粒，酶切线性化后，与超螺旋腺病毒骨架质粒pAdEasy-1以电穿孔的方法共转化大肠杆菌K15183进行同源重组，经酶切鉴定筛选正确重组子，以线性化重组质粒转染293细胞，制备重组腺病毒小鼠T-bet重组腺病毒MdT-bet，最后以PCR及Western blot方法鉴定T-bet的表达。结果感受态大肠杆菌BJ5183细菌内同源重组24h后共

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