目的:分析重组人粒细胞刺激因子（rhG-CSF）的N端异质性。方法:采用反相超高效液相色谱法分离rhG-CSF中N端不一致的各组分;色谱条件:采用Waters BEH 300 C4（2.1 mm×100 mm,1.7μm）色谱柱,以0.1%三氟乙酸水溶液（A）-0.1%三氟乙酸乙腈溶液（B）为流动相,梯度洗脱,流速0.2 mL·min^-1。分别收集各组分并冷冻干燥,采用N端测序仪测定各组分的N端氨基酸序列;液质联用测定rhG-CSF的相对分子质量,对N端测序结果进行验证质谱仪采用Waters公司Xevo G2-S质谱仪,正离子电喷雾离子源,毛细管电压3.0 kV,锥孔电压40 V,去溶剂气体温度350℃,去溶剂气体流速800 L·h^-1,扫描范围（m/z）500～3 000。结果:色谱分离得到3个组分;N端氨基酸序列测定结果显示,3个组分分别为rhG-CSF主成分及2个N端异质性相关蛋白;质谱相对分子质量测定结果与N端测序结果一致。结论:应用色谱法及质谱法可对rhG-CSF中的N端异质性相关蛋白进行分析检测,检测结果可为国产rhG-CSF制品的质量控制和标准提升提供参考和数据支持。