目的建立特异、灵敏的半巢式PCR方法以期用于检测中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)。方法根据MERS-CoV N蛋白基因设计并合成特异性内侧、外侧引物。通过条件优化,建立MERS-CoV半巢式PCR检测体系,扩增产物测序后与目的序列进行同源比对。以10倍系列稀释重组质粒为标准品,与普通PCR反应进行比较,检测半巢式PCR方法的灵敏度。以其他6种呼吸道病原体及冠状病毒基因为对照,检测半巢式PCR方法的特异性。结果使用建立的半巢式PCR方法扩增的特异片段与GenBank中发表的MERS-CoV基因序列同源性为100%;半巢式PCR检测方法的灵敏度为1.17×101拷贝,比普通一轮PCR扩增的灵敏度(1.17×105拷贝)提高了104倍;用该方法检测MERS-CoV基因为阳性,其他6种呼吸道病原体及冠状病毒基因检测均呈阴性。结论建立的MERS-CoV半巢式PCR方法具有良好的准确性、灵敏性和特异性,为MERS-CoV感染的诊断提供了一种新的、可靠的检测手段。